小肠黏膜下层细胞外基质水凝胶的制备和其对肝组织损伤修复的影响.pdfVIP

小肠黏膜下层细胞外基质水凝胶的制备及其对肝组织损伤修复的影响  中文摘要  小肠黏膜下层细胞外基质水凝胶的制备及其对肝组织损 伤修复的影响 中文摘要 研究背景： 小肠黏膜下层 (small intestinal submucosa, SIS ）细胞外基质（extracellular matrix, ECM ）是将小肠去除浆膜层、肌层及黏膜层，以及一系列加工和消毒处理后，获得 的一种不含细胞的细胞外基质[1] 。SIS是一种理想的组织工程学生物材料，在机体组 织修复方面具有以下三个方面的生物学优势：1. 具有组织相容性，SIS主要由Ⅰ、Ⅲ 型胶原蛋白构成，并含有丰富的纤维连接蛋白及生长因子，即使经过一系列加工处理 后SIS仍还有这些生长因子。如成纤维细胞生长因子-2、转移生长因子-β、血管内皮 生长因子、血小板源性生长因子等,这些物质均为正常细胞外基质的成分。其中Ⅰ型 胶原蛋白及纤维连接蛋白均可于细胞膜特异性结合，并激活细胞传导通路促进细胞的 粘附，而其他各种生长因子也可以刺激细胞增殖。因此，SIS不仅能为宿主细胞提供 较佳黏附和迁移的自然环境，还能很快与宿主组织结合，促进血管生成，恢复组织功 能。2. 具有免疫原性和安全性，经过机械法和化学法联合处理的SIS不含细胞，其携 带病原体的概率很低，而且其免疫原性弱，即使异种移植后亦不产生排斥反应。SIS 经消毒处理后，所含有的各种组分不会丢失或失活，超微结构及机械特性无明显改变。 因此，经消毒处理后SIS具有较高的安全性。同时SarikayaA等[2]指出SIS浸出液对大肠 杆菌和金黄色葡萄球菌均具有抑制作用，可以抑制细菌的生长。3. 具有生物力学性 能，小肠黏膜下层是一种非线性材料，在纵轴方向（无论是否刨开管壁）的抗拉伸强 度相当于肌腱和韧带组织的1/7到1/4。SIS作为体内组织工程的材料，具有适当的机械 特性，能承受周围组织压力，为再生细胞提供足够的生长空间。因为其良好的生物学 优势，SIS 已经广泛应用于现代生物材料和组织工程医学领域，如肌腱重建、下泌尿 [3] 道重建、硬脑膜修补、血管重建、修复部分或全层皮肤损伤等 。目前关于SIS在肝 脏组织损伤修复方面的研究较少，但其具有较大的研究价值和应用潜力。因此，本研 I 中文摘要  小肠黏膜下层细胞外基质水凝胶的制备及其对肝组织损伤修复的影响  究使用猪小肠自制小肠黏膜下层细胞外基质，通过制备猪小肠黏膜下层（SIS ）细胞 外基质水凝胶，注射至由四氯化碳（CCL ）诱导肝损伤的损伤部位，以研究SIS细胞 4 外基质水凝胶材料对化学性肝损伤的修复作用。通过探讨注射性SIS细胞外基质水凝 胶材料治疗化学性肝损伤的可行性，为临床上针对急、慢性肝损伤的修复和治疗提供 依据和新的方法。 方法： 1. 取新鲜猪小肠组织，运用SDS脱细胞和酶消化方法，制备小肠黏膜下层细胞外 基质水凝胶；利用HE染色方法检测基质材料脱细胞效果；并检测制作的水凝胶材料 的温度敏感性；MTT方法检测水凝胶材料对人正常肝细胞的生物相容性。 2. 培养人正常LO2肝细胞，分为正常对照组、CCL 损伤组、水凝胶处理CCL 损 4 4 伤细胞组，采用流式细胞仪检测各组细胞的凋亡情况，EdU细胞增殖染色法检测各组 细胞的增殖情况，ELISA方法检测各组细胞培养上清中bEGF 、VEGF 、NGF 、IL-4 、 IL-6、IL-8含量的变化，以检测自制小肠黏膜下层细胞外基质水凝胶对CCL4损伤肝细 胞的修复作用。 3. 采用经腹膜连续3个月注射四氯化碳法，建立C57/BL小鼠化学性肝损伤模型。 在B超引导下，用31G注射针将自制小肠粘膜下基质水凝胶注射至损伤肝包膜下。收 集处理后小鼠的血清和肝组织，观察SI