小鼠鞘内注射AAV9载体介导跨区神经系统的广泛转基因表达.pdfVIP

目 录 中文摘要………………………………………………………………………．1 英文摘要………………………………………………………………………．4 英文简称………………………………………………………………………．9 研究论文小鼠鞘内注射rAAV9载体介导中枢神经系统的广泛转基因表达 前言……………………………………………………………………．．1。0一日U舌……………………………………………………………………．． 材料与方法………………………………………………………………10 匀口7K………………………………………………………………………上y结果………………………………………………………………………19 附图………………………………………………………………………20 讨论………………………………………………………………………25 结论………………………………………………………………………27 参考文献…………………………………………………………………27 综述腺相关病毒介导的神经营养因子表达对肌萎缩侧索硬化基因治疗 的研究进展………………………………………………………．．30 致谢…………………………………………………………………………．．41 个人简历……………………………………………………………………．．44 万方数据 中文摘要 小鼠鞘内注射r,AAV9载体介导中枢神经系统的广泛转基因表达 摘 要 目的：通过导入治疗性基因来治疗人类疾病的思想始于二十世纪七十 年代，随后发现病毒可作为基因治疗的载体。理想的病毒载体必须具备三 个特性：一是对目标组织的高亲和性和高转导效率及对非目标细胞、组织 和器官的低转导效率。二是该病毒载体可以在一段时间内以持续的、具治 疗作用的水平表达。第三也是最重要的，就是病毒载体相关的副作用如致 病性及机体免疫反应最小。 腺相关病毒(Adeno—associatedvirus，AAV)是依赖病毒属细小病毒科 的一种。细小病毒属是一种非自主性病毒，需要与其他病毒共同感染以使 其表达，并且无致病性，它的这些生物特性大大降低了丸对作为基因治 疗载体的副作用。重组腺相关病毒(recombinantA“rAAV)因其安全性 好、宿主细胞范围广、免疫源性低，在体内表达外源基因时间长等特点， 被视为最有前途的基因转移载体之一，目前已广泛应用于基础及临床研 nervous system，CNS)的 究。rAAV能介导目的基因在中枢神经系统(central 并在脑和脊髓内长时间表达目的基因，故在中枢神经系统疾病的基因治疗 中rAAV9的优势明显。 基因治疗的关键是转基因要被输送到足够数量的疾病受累细胞中。不 同的注射方式所引起的转基因表达的分布及所需病毒量不同。实质内注射 可转导注射局部，但对于病变范围累及脊髓全长、脑干及皮层的肌萎缩侧 索硬化并不适用。静脉内注射rAAV9虽可转导新生小鼠CNS的广泛区域， 但对成年小鼠CNS转导效率较低，且存在靶向性不强、载体需求量大及潜 在的安全性问题。脑脊液内注射rAAV载体没有血脑屏障的阻碍，直接与 CNS接触。主要途径包括脑室内注射、小脑延髓池注射和鞘内注射，其中 鞘内注射对脊髓的转导更具优势，是没有创伤的基因治疗给药方法。有研 究者应用小鼠鞘内置管注射或直接腰椎穿刺的方法研究了rAAV载体介导 的转基因表达，但存在的共同问题是不同个体间转导程度和范围变异较 大，作者认为与操作者置管及注射成功与否的不确定性有关。直接腰穿鞘 万方数据 中文摘要 内注射相对于鞘内置管更安全、无创且简便可行，但同时存在小动物固有 的技术难度。操作者直接鞘内注射的成功程度不同将导致个体间转导效率 及临床效果的巨大差异。因此，需要一种无创、简单、可控性强的广泛CNS 转导方法。 本实验针对小鼠腰椎穿刺鞘内注射