胎牛血清解冻和灭活.docVIP

解决血清使用中的常见问题 ? 1、 如何储存和解冻血清才不会使产品质量受损？ 将血清从冷冻箱取出后，先置于2～8冰箱使之融解，然后在室温下使之全融。但必须注意的是，融解过程中必须规则地摇晃均匀。 长时间储存在2－8时，血清中的各种蛋白和脂蛋白（如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等）可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。因此，推荐在-20以下储存血清，并避免反复冻融。 我们建议血清应保存在-2O。若存放于4时，请勿超过一个月。若一次无法用完一瓶，建议无菌分装血清至恰当的灭菌容器内，再放回冷冻。 2、血清中包含絮状沉淀，它们是什么，怎么处理？  沉淀包含纤维蛋白和脂蛋白。这是正常特性，不会影响产品性质。要除去沉淀，离心血清（400g，1-2分钟）或者简单的让其沉淀在瓶子底部，将血清小心的转移到另一个无菌瓶里（一般不建议采用过滤的方法除去沉淀，因为沉淀会堵塞滤膜而无法过滤）。大多情况轻轻摇动沉淀并加热至37就会再溶解。所以，使用产品时要摇动并加热血清至37，沉淀会自然消失。 3、、 如何避免血清中产生沉淀？  按如下操作可避免沉淀的产生： （1）解冻血清时，请随时将之摇晃均匀，使温度及成分均一，减少沉淀的发生。 （2） 血清分装冻存时，须规则摇晃均匀（小心勿造成气泡），使温度与成分均一。 （3） 勿直接由-20直接至37解冻，因温度改变太大，容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。 （4） 勿将血清置于37太久，否则血清会变得浑浊，同时血清中许多较不稳定的成份也会因此受到破坏，从而影响血清的品质。 （5） 血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以无须做此步骤。 （6） 若必须做血清的热灭活，请遵守56，30分钟的原则，并且随时摇晃均匀。温度过高，时间过久或摇晃不均匀，都会造成沉淀物的增多。 、 培养基中添加了血清和抗生素后，可长期保存吗？ 一旦您在新鲜培养基中添加了血清和抗生素时，您应该在两到三周内使用它。因为一些抗生素和血清中的基本成分在解冻后就开始降解。、 为什么要热灭活血清? 加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件，刺激平滑肌收缩，细胞和血小板释放组胺，激活淋巴细胞和巨噬细胞。在免疫学研究，培养ES细胞、平滑肌细胞时，推荐使用热灭活血清。 、 有必要做热灭活吗? 实验显示，经过正确处理的热灭活血清，对大多数的细胞而言是不需要的。经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进，或完全没有任何作用，甚至通常因为高温处理影响了血清的质量，而造成细胞生长速率的降低。而经过热处理的血清，沉淀物的形成会显著的增多，这些沉淀物在倒置显微镜下观察，像是“小黑点”，常常会让研究者误以为是血清遭受污染，而把血清放在37环境中，又会使此沉淀物更增多，使研究者误认为是微生物的分裂扩增。 若非必须，可以不需要做热处理这一步。不但节省时间，更确保血清的质量! 、细胞培养中出现黑点是污染吗？如何处理？ 一旦您在细胞培养的过程中发现有黑点生成，首先，要肉眼观察培养基是否混浊，然后，在镜下观察培养细胞生长的状态，黑点是否游动。如果细胞被污染，微生物则会大量繁殖，培养基就会迅速变黄、变混浊。污染包括细菌污染、支原体污染等。 如果在镜下观察细胞，生长状态良好，与黑点出现前相比，没有任何变化，那么，黑点的出现可能与以下几种情况有关： （1）细胞生长过老，破碎的细胞残骸； （2）血清质量不好，反复冻融的结果； （3）配制培养基的pH值偏高，不宜细胞生长； （4）配制培养基的水质、容器不合格。可应用离心、过滤的方法去除这些黑点； （5）培养原代细胞中出现小黑点，可能是原代组织中的杂质，多次传代可以消除。 、 细胞培养中如何防止黑点生成？ （1） 尽可能地减少血清冻融次数。 （2） 培养基无需37水浴。 （3） 培养基保持最佳PH值7.0- 7.2。 （4） 严格控制配制培养基的水质，容器定期刷洗。 （5） 掌握细胞传代的最佳时机，细胞切勿生长过老。 化冻将血清从-20度冰箱中取出，室温（或浸于自来水中）化冻（约需要30分钟至2小时，也可放于4度冰箱化冻过夜；化冻后若不马上灭活，可以放入4度冰箱中暂时保存）2、灭活（1）放入室温的水浴锅内开始加热（同时放入一个空的血清瓶，内装100ml自来水，插入一根温度计，温度监控以此为准）（2）当温度计显示56度时，停止加热，改为间断加热，维持56度（±0.5度）30分钟（±3分钟；若不小心使温度上升超过56度，则：若仍未超过60度，且时间很短，比如不超过5分钟，则仍可使用；若超过60度，或者时间较长，则弃去不用，或者尝试用于一些普通细胞的培养）（3）取出，自然冷却至室温（约需1-3小时），可分装或-20度继续冻存。3、分装（1）转入