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植块法原代培养人衰老皮肤成纤维细胞[摘要]目的：探索和建立人衰老皮肤成纤维细胞的体外培养的方法，为其在医学美容抗衰老研究中的应用提供科学依据。方法：植块法原代培养人衰老皮肤成纤维细胞；倒置显微镜下观察细胞的生长状态；HE染色观察细胞的形态及着色情况。结果：用植块法培养的人衰老皮肤成纤维细胞在显微镜下呈长梭形，有突起，平行、放射状或漩涡状排列。结论：确立了人衰老皮肤成纤维细胞的体外培养的方法，使其可供于延缓皮肤衰老的实验研究。 [关键词]人；衰老；皮肤；成纤维细胞；植块法细胞培养 [中图分类号]Q813.1 [文献标识码]A [文章编号]1008-6455（2013）01-0057-03 Explanted culture of aged human skin fibroblasts CONG Jing1，SU Qiu-xiang1，GUO Li1，ZHANG Yong1，XIE Hui1，WANG Shuang-xun2，WU Jing-dong2，ZHOU Yang3 （1.Shenyang Medical College， Shenyang 110034，Liaoning，China； 2. Liaoning University of Traditional Chinese Medicine， Shenyang 110031，Liaoning，China； 3.The Fifth People’s Hospital of Shenyang， Shenyang 110023，Liaoning，China） Abstract： Objective To investigate a method for primary culture of aged human skin fibroblasts in vitro and to provide a reliable basis for researches of delaying skin aging. Methods Fibroblasts were cultured with explanted culture method. The morphology of fibroblasts were observed under inverted phase-contrast microscope and light microscope stained by HE. Results Aged human skin fibroblasts were obtained. Cells are long spindle in shape arranged in parallel or radiate or swirl way under microscope. Conclusions The method for primary culture aged human skin fibroblast in vitro is found. This study provides an efficient technique for delaying skin aging research. Key words： human； aged skin； fibroblasts； explanted culture method 人皮肤成纤维细胞是皮肤真皮层中最主要的细胞成分，能够促进表皮细胞的迁移、增殖和分化，对真皮正常组织结构和功能的维持和修复具有重要作用。皮肤衰老的多种临床表现均与成纤维细胞的结构和功能的异常有关。目前许多研究显示[1-3]，正常皮肤成纤维细胞的体外培养技术比较成熟，且应用广泛，但多取材于年轻幼稚的，甚至是胚胎时期的皮肤。关于体外培养人衰老皮肤的成纤维细胞的相关报道较少。本实验拟通过对衰老皮肤成纤维细胞的分离和体外培养，探索体外培养衰老的成纤维细胞的方法及相关影响因素，在细胞水平上对衰老皮肤成纤维细胞的形态及生物学特性进行研究，为研究成纤维细胞在皮肤衰老过程中的作用机制提供可靠的科学依据。 1 材料和方法 1.1 实验材料及主要试剂：皮肤标本10例，均取自施行眼袋切除术和倒睫矫正术的中老年女性眼睑周围的皮肤，年龄45～60岁，由中国医科大学第四附属医院眼科和辽宁中医药大学美容科提供。DMEM培养基、胎牛血清，美国GIBCO公司；胰蛋白酶，美国Sigma公司；磷酸盐缓冲液（PBS），中国北京中杉金桥生物技术有限公司；其他试剂为国产分析纯。 1.2 实验方法 1.2.1 分离表皮和真皮：用含双抗的D-Hanks液（青霉素100KU/L、链霉素100mg/L）洗净皮片，剪去皮下组织。洗必泰浸泡皮片8min，D