细丝蛋白A调控表皮生长因子受体活化促进乳腺癌细胞增殖和迁移.pdfVIP

中文摘要 细丝蛋白A调控表皮生长因子受体活化 促进乳腺癌细胞的增殖及迁移 摘 要 目的：乳腺癌是威胁当代女性生命健康最主要的恶性肿瘤之一，2007 年卫生部调查统计显示其临床发病率为我国女性所患恶性肿瘤之首。据统 计全球乳腺癌的发病率和死亡率呈逐年上升趋势，而其发病机制至今仍未 完全阐明。针对这一严峻形势，探索新的乳腺癌治疗思路，寻找更为有效 的治疗靶点仍然是乳腺癌治疗领域的研究热点。 factor 表皮生长因子受体(epidermalgrowth tyrosine 于受体酪氨酸激酶(receptor 上的酪氨酸磷酸化，通过信号转导参与调节细胞的增殖、分化及运动等， 在正常乳腺的发育、成熟、退化过程中发挥着重要作用。四种受体在乳腺 癌细胞通常呈现过表达。许多研究资料证实HER-2阳性是乳腺癌患者预 后不良的一大主因，而EGFR过表达也是乳腺癌患者预后的不利标志，但 疗，但有效率不高，且伴有耐药问题，故开发更有效的抗EGFR及抗HER-2 药物势在必行。 细丝蛋白A(filamina，FLNa)是一种肌动蛋白结合蛋白(actin binding 种细胞膜蛋白结合，参与细胞增殖、粘附、迁移、侵袭等多种行为。FLNa 还干预细胞内多种受体的表达，从而影响多条信号转导通路，参与肿瘤的 发生与发展。已有研究显示FLNa在肺癌、转移性乳腺癌、低分化星形细 胞瘤、前列腺癌、黑色素瘤等多种肿瘤中的表达均增多。并有研究显示 FLNa的表达量与乳腺癌的恶性程度密切相关，但详细机制仍不清楚。 中文摘要 报道。 本研究拟通过g(1)采用Westernblot检测不同乳腺癌细胞株中FLNa、 不同乳腺癌细胞的增殖及迁移能力；(3)质粒转染技术敲低或增加FLNa 的表达后，观察乳腺癌细胞增殖能力、EGFR、HER．2酪氨酸磷酸化水平 及其下游信号通路分子的变化。旨在从细胞、分子水平上分析FLNa对乳 腺癌细胞增殖、迁移的影响，及其对表皮生长因子受体磷酸化及相应信号 通路的调控作用，为更有效治疗乳腺癌寻找新靶点。 方法： 1Western blot检测不同乳腺癌细胞蛋白表达情况 培养人乳腺癌MDA-MB．436细胞、MDA．MB．231细胞及SKBR-3细 胞，收集细胞提取蛋白后进行Westemblot，依次检测各种细胞中FLNa、 EGFR、HER-2的蛋白表达情况。 2MTT比色分析法检测不同乳腺癌细胞的增殖能力 将上述3种乳腺癌细胞消化计数后接种至96孔板，采用MTT法检 测EGF(20nM)刺激24h后每种细胞的增殖能力。 3流式细胞术检测不同乳腺癌细胞的细胞周期分布情况 培养乳腺癌细胞48h后收集细胞，以70％乙醇4C固定过夜，应用流 式细胞仪(flow 情况。 ． 4划痕修复实验观察不同乳腺癌细胞的迁移能力 培养乳腺癌细胞，待细胞贴壁融合达90％以上进行划痕，分别于划痕 后oh、6h、12h用倒置显微镜观察并拍照，利用软件测量划痕宽度变化。 5质粒转染后MTT比色分析法检测细胞增殖能力 情况。 中文摘要 laser 光染色，用激光共聚焦显微镜(confocal scanning 分别观察FLNa与EGFR、FLNa与HER-2的定位情况。 7质粒转染后Westernblot检测细胞内蛋白表达情况 EGFR、p-HER、HER、p-ERK及ERK的表达情况。 结果： 1不同乳腺癌细胞的蛋白表达及增殖、迁移能力的比较 1．1不同乳腺癌细胞蛋白表达情况的比较 MDA-MB．436、MDA．MB．23 1．2不同乳腺癌