全反式维甲酸增强超声微泡包裹的单纯疱疹病毒胸苷激酶自杀基因治疗荷肝癌裸鼠的效果.docVIP

全反式维甲酸增强超声微泡包裹的单纯疱疹病毒胸苷激酶自杀基因治疗荷肝癌裸鼠效果的研究 蔡宇，廖伟，周世骥，唐勇，刘长安，李生伟 （400010 重庆，重庆医科大学附属第二医院肝胆外科） 【摘要】目的 探讨全反式维甲酸（ATRA）能否提高微泡包裹的单纯疱疹病毒胸苷激酶（HSV-TK）自杀基因对肝癌的体内治疗作用。方法 用人肝癌SMMC-7721细胞建立皮下裸鼠移植瘤模型，先检测不同剂量ATRA本身的抗肿瘤效应；再用ATRA联合基因治疗，各组测量肿瘤体积，计算抑瘤率，western blot检测输注的目的基因质粒的表达，治疗结束后处死动物，标本行病理学HE染色检查，免疫组化检查连接蛋白Cx32的表达。结果 ATRA在一定剂量下无抗肝癌作用，但超过一定剂量即具有明显抗肝癌效应；与对照组相比，ATRA联合基因治疗组抑瘤率明显提高（P值均0.05）。ＨＥ结果显示采用ATRA联合基因治疗后肿瘤坏死细胞明显较对照组多，免疫组化显示ATRA处理组中，Cx32蛋白表达增加，且以胞膜表达为主。结论　ATRA具有抗肝癌作用；ATRA能增强超声微泡包裹的HSV-TK自杀基因杀伤肝癌的效果，其可能机制与ATRA促进了Cx32蛋白的正常表达有关。 【关键词】 肝癌；全反式维甲酸；单纯疱疹病毒胸苷激酶基因；超声微泡;连接蛋白32 Research on all-trans retinoic acid enhancing the killing effect of ultrasound microbubble carring herpes simplex virus thymidine kinase on hepatocellular carcinoma in nude mice 【Abstract】In order to study whether All-trans retinoic acid (ATRA) could enhance the killing effect of ultrasound microbubble carring herpes simplex virus thymidine kinase （HSV-TK）on hepatocellular carcinoma in vivosignificantly enhanced in experimental group(P0.05).The extensive necrosis was observed in experimental group,compared with control group.The expression of protein Cx32 were increased in groups treated with ATRA.Conclusion ATRA could enhance the killing effect of ultrasound microbubble carring HSV-TK on hepatocellular carcinoma in vivo,which is likely associated with promoting the expression of Cx32 by ATRA. 【key words】hepatoma;all-trans retinoic acid; HSV-TK gene; ultrasound microbubbles;Cx32 肝癌的基因治疗已成为继手术、放化疗等治疗后的一种新兴疗法。其中以单纯疱疹病毒胸苷激酶（herpes simplex virus thymidine kinase,HSV-TK）(a)和最短径(b)，每隔3d测量1次，计算肿瘤体积V=ab2／2，单位为mm3，抑瘤率=（A组肿瘤平均体积－治疗组肿瘤平均体积）/ A组肿瘤平均体积×100%。根据测量肿瘤体积的大小绘制表格，并观察裸鼠生长情况，如体重，毛发，营养等。（2）western blot检测EGFP蛋白表达情况（本实验所用质粒为EGFP基因与HSV-TK基因共表达载体，两者共用一个启动子，转染该质粒后两种基因可以同时表达，且互不干扰对方的表达，为本课题组前期合成[4]）：采用Aoi等[5]的方法首次注射pIRES2-EGFP-HSVTK 质粒48h后采用western blot检测EGFP蛋白的表达情况，（3）肿瘤组织病理学检查：治疗结束后处死裸鼠，取出肿瘤组织用甲醛溶液固定，常规石蜡切片；HE染色，观察肿瘤组织的病理形态学变化，了解肿瘤坏死及炎症细胞侵润情况，免疫组化SABC法检测Cx32蛋白的表达及定位情况。 1.8统计学分析：数据采用均数±标准差±S表示,用SPSS17.0统计软件进行重复测量资料的