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生化实验六 过氧化氢酶米氏常数的测定
过氧化氢酶米氏常数的测定生命科学学院 11级拔尖班111070094 张茜实验目的了解米氏常数的测定方法学习提取生物组织中的酶实验原理实验中的反应H2O2被过氧化氢酶分解出H2O和O2,未分解的H2O2用KMnO4在酸性环 境中滴定,根据反应前后的浓度差可以算出反应速度:2H2O2酶?→2H2O+O22KMnO4+5H2O2+3H2SO4?→2MnO4+K2SO4+8H2O+5O2本实验以马铃薯提供过氧化氢酶,以1/v～1/[S]作图求Km.米氏反应动力学米氏方程(Michaelis-MentenEquation):实验试剂1. 0.02mol/L 磷酸缓冲溶液(pH=7.0):实验室提供.2. 酶液:称取马铃薯5g,加缓冲液10mL,匀浆过滤.3. 0.01107mol/L 高锰酸钾.4. 0.098mol/L H2O2.5. 25%H2SO4.实验操作取6只锥形瓶,按表1的顺序加入试剂.先加好过氧化氢和蒸馏水,加酶液后立即混合,依次记录各瓶的起始反应时间. 反映到达5min立即加入硫酸终止反应,充分混匀.用0.0109mol/L 的KMnO4 溶 液滴定瓶中剩余的过氧化氢至微红色,记录消耗的高锰酸钾体积.实验结果与讨论实验结果管号012345实际消耗KMnO4/mL0.002.993.935.447.9415.89v/(mmol/min)00.004740.003670.005460.00730.00844[S]/(mol/L)00.0098 0.0123 0.01640.02450.0490 1/v—327.8 364.0 381.4 197.9 99.51/[S]—102.0 81.6 61.1 40.8 20.4 表2: 实验结果和计算结果Km=斜率/截距=0.03479
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