记忆性CD4+T细胞在环孢素A作用下介导小鼠异位心脏移植急性排斥反应的探究.pdfVIP

摘要 摘要 背景及目的 器官移植己成为许多实质器官终末期疾病唯一有效的治疗方法，但仍面临着 许多挑战。尽管免疫抑制剂的发展日新月异，器官移植的排斥反应仍然是导致移 植失败的主要原因。近年的研究发现，免疫记忆可能是导致免疫抑制剂失效的元 凶。目前，移植受体体内因反复输血、多次妊娠、微生物感染、长期血液透析和 再次移植产生的预存抗体，因记忆性体液免疫可导致急性排斥反应已成为共识。 然而，现阶段临床主流免疫抑制剂几乎都是针对抑制初始T细胞的激活和归巢 功能，而记忆性T细胞的激活和归巢途径与初始T细胞明显不同。研究证实， 在大剂量应用免疫抑制剂的患者体内，仍有大量记忆性T细胞的存在，这就表 明免疫抑制剂并不能抑制同种反应性记忆性T细胞的形成。本研究在小鼠同种 异系心脏移植模型的基础上，探讨记忆性CD4+T细胞在免疫抑制剂作用下是否 仍能导致急性排斥反应，对提高器官移植质量、增加器官移植患者生存几率具有 重要意义。 方法 1．皮肤预致敏模型的建立 以近交系BALB／C小鼠为供体，近交系C57BL／6小鼠为受体，进行背部皮肤 移植。 2．CD4+记忆性T细胞的分离、纯化及表型鉴定 皮肤移植8周后，取受体鼠脾脏，制备脾淋巴细胞悬液。用小鼠CD4+记忆 性T细胞磁珠分选试剂盒分离出CD4+记忆性T细胞并进行活性鉴定。加入相应 抗体后，用流式细胞仪鉴定其表型。以同样的方法，用小鼠未致敏CD4+T细胞 免疫磁珠分选试剂盒重复上述步骤，获得未致敏CD4+T细胞。 3．过继性记忆性心脏移植模型 将预致敏C57BL／6小鼠脾脏Tm细胞过继转移给正常C57BL／6小鼠，然后 以BALB／c小鼠为供体，采用套管法进行颈部异位心脏移植。 摘要 4．检测指标 移植物生存期观察：术后每日触摸颈部搏动情况判断移植物是否存活， 搏 动停止即判断为完全排斥。 移植心脏的病理学检测：取移植物心底部分，制做冰冻切片并行HE染色， 光镜下观察。器官排斥程度参照ISHLT标准进行判定，并进行组间的比较 轱电 当日示 1．流式细胞仪鉴定磁珠分选法分离出的CD4+记忆性T细胞浓度大于92％，可 用于细胞输注 2． 皮肤移植模型制作成功率95％，心脏移植模型制作成功率82．5％。心脏移植 实验组与对照组供心中位存活时间分别为7d与30d。两者差异具有统计学 意义(PO．01)。 3．冰冻切片示实验组心肌细胞变性坏死，血管周围及间质中有大量炎性细胞浸 润：对照组心肌间质中有少量炎性细胞浸润。按ISHLT标准分级比较后经秩 和检验结果显示实验组的移植物急性排斥反应程度高于对照组。 结论 本实验证实预先输注CD4+记忆性T细胞的小鼠，其供心存活时间明显短于 对照组，且供心急性排斥反应级别与对照组相比较高，说明CD4+记忆性T细胞 在免疫抑制剂作用下仍能导致急性排斥反应，导致移植物坏死。分析其原因可能 为所选用的免疫抑制剂无法抑制CD4+记忆性T细胞的激活。而CD4+记忆性T 细胞的活化途径究竟如何绕开所选免疫抑制剂的作用，及何种免疫抑制药物能够 抑制记忆性CD4+T细胞的活化等，还有待进一步研究。 关键词：记忆性CD4+T细胞；器官移植；急性排斥反应 II Abstract Abstract and Backgroundobjectives Ogran hasbeenthe effective of some transplantation only approach treating diseases，butstillfaced the end-stage manychallenges．Althoughimmunosuppressant technichhasa thelast