诱导多能干细胞转录因子在肝细胞癌复发和转移的作用研究.pdf

目 录 摘 要 中文摘要 英文摘要 正 文 引 言 第 一部分 第 二部分 第 三 部 分 讨 论 结论 参考 文献 致综附 述谢件 中文摘要 中文摘要 原发性 肝癌 是我 国最常见 的恶 性肿 瘤 之 一 ，其 死亡率 居全 球 第三 位 ，在 我 国 居恶性肿瘤 第2位 」〔‘。虽然近年来肝癌研 究 已取得很大进展 ， 以外科 为主 的综合 治疗取得 显著疗 效 ，但根 治性切 除术后 极 高 的复发转移 率是影 响肝癌疗 效进 一步 提 高 的主要 障碍 幻〔。因此 ，探 索肝癌 复发转移 的机 制 ，寻找有 效 的靶 向治疗 是进 一步提 高肝癌 患者长 期生存 的关键 幻〔。 2006年 ，Takaha sh i和Yamanaka将OCT4 、SOXZ 、C一MYC和KLF4 四个 转 录 因子 导 入 小 鼠皮肤 成纤维细胞 ，成功获得类似 于胚胎干细胞 (emb ry on ic Stem Cells ， ES细胞 ) 的多能干 细 胞 ，命 名 为 “诱 导 多 能干 细胞 ” (indueed p lur ipoten : Stem ee lzs. iPS细胞) ，〔〕‘。2007年 ，威斯康辛大学Tho ;11SOn研 究小组也报道 了成功诱 导 胎 儿体 细胞 转化 为具有 干细 胞 基本 特 征 的人类 115细胞 ，所 不 同的是 他 们使用 慢 病 毒 作 为载 体 ，选择 了ocT4 、soxZ 、NANoG 、L 工N28等4个基 因进 行转 录 马1‘。这 一 类 由成 熟组 织细 胞经 重 新编程 后转 化而成 的干 细胞 ，被 证 实与真 正 的胚 胎干 细胞 具有 一样 的分化潜 能 。 肿 瘤 千细胞 理论认 为 ，肿 瘤 干 细胞和 胚 胎 干细 胞之 间具有 许 多共 同特 征 ，它 们 都具有 自我复制 ，无 限增 殖 ，多 向分化 的潜 能 ，相似 的信 号传 导通 路 既调 节胚 胎干 细胞 也调节肿瘤干 细胞 的 自我 更新 。可 以推测 ，如 果肿瘤 的复发和转移源 于 肿瘤干 细胞 的存在 ，那 么在 干细胞 中维持其 分化增殖潜 能 的相关基 因及 其信 号转 导通路 t一定在肿 瘤 的复发及 转移 中起着 重要 的作用 。因此 ，如 果肝细胞癌 中存在 这 样 一群 OC f4‘、SOXZ 、C一MYC 、KLF4 、NANOG ，L IN28高表达 的细 胞 ，这 些细 胞 可 能是具有 自我更新和无 限增殖 的潜 能的 “干细胞样细胞 ”，而这样一群干细胞 的 存 在 必将 成 为肿 瘤 手 术 ，放 化疗 后 复发及 转 移 的根 源 。 本研 究通 过W estern b lot，Quantitat ive 尺T一PCR (Rea ltime RT一尸CR)及 免 疫 组化 方 法研 究诱 导 多 能干 细 胞转 录 因子OcT4 、SOxZ 、C一MYC 、KLF理、NANOG ，L工N28 在 肝 癌 细 胞 系及 肝癌 组 织标 本 中的表达 ， 明确其在肝 细胞 癌 复发 及 转 移 中的作 用 ，进一步探索肝癌干 细胞标 志物 ，为肝癌 的复发转移治疗提供 新 的治疗靶 点 。 第一部分 诱 导多能干细胞转录 因子在肝癌 细胞系 的表达 目的 : 本研 究 旨在 探索在 肝正常细胞株 中及 不 同侵袭转移潜 能人肝癌 细胞株 中诱 导 多能干 细胞转 录 因子 的差异表达 。 中文摘 要 方 法 : 提 取正常肝细胞株7701 ，低侵袭转移潜 能细胞株H 即GZ，sMMc7721 ，MHcc97L