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载脂蛋白E对原代大鼠皮层神经元胞内钙稳态的影响 摘要 目的：采用激光共聚焦钙离子荧光成像技术观察不同亚型载脂蛋白E(apoE4， apoE3)对原代培养的大鼠皮层神经元胞内静息钙水平和NMDA诱发钙反应的影 响。 方法：荧光染料选Fluo．3／AM，对皮层神经元有效负载后在激光共聚焦荧光显 微镜下观察并记录其胞内静息钙水平或其变化。根据药物作用时间将实验分为急 性和慢性两部分。在急性实验部分，培养10d的皮层神经元洗去培养基，负载染 料，先记录lmin的胞内静息钙水平，然后，分别给予不同浓度的重组人apoE4、 NMDA， 继续观察lmin以了解皮层神经元对NMDA的钙反应。在慢性实验部分，皮层神 经元培养8d后进行药物干预，作用48h，洗去培养基，负载染料，观察胞内静息 min。 NMDA，观察皮层神经元NMDA钙反应1 钙水平lmin；然后给予100pmol／L 结果： (1)急性给予apoE4剂量依赖性和时间依赖性升高了细胞内的静息钙 水平。100nmol／L和300nmol／Lmin，神经元胞浆相对钙荧光强度 apoE4给药后20 min、10min和20min 差异俾O．01)；同一浓度(300nmoFL)的apoE4在给药后5 不同时间点，其相对荧光密度分别升高到118．25士8．08％、138．74士7．57％和 16．76士8．35％(po．05)。 apoE4引起的【ca2+】i升高(137．74士6．89％)被MK801降至1 apoE4使 诱发的钙反应增加至 NMDA(100pmoI／L) 335．75士9．65％(P0．05)和 被MK801有效阻断。lOOnm01／L和300nmol／L apoE4引起的 的钙反应明显降低。100nmol／L和300nm01／L 胞内静息钙水平及NMDA钙反应的显著改变。 结论： (1)ApoE4急性作用可以显著升高神经元胞内静息【ca2+】i，且呈浓度 胞内静．g[Ca2qj升高，而MK．801单独作用无影响；(2)ApoE4急性作用可以明 显增加NMDA诱发的胞内钙离子浓度升高，且呈浓度依赖效应，而apoE3则无影 阻断该效应； (4)ApoE4慢性作用可降低NMDA诱发的胞内钙反应，呈浓度依 NMDA胞内钙反应降低。 钙成像实验结果提示，即使在生理浓度下，apoE4也可通过激活NMDA受体 而扰乱神经元胞内钙稳态。由此导致的细胞内钙超载可能是AD发病早期的关键 事件，据此设计特异性NMDA受体阻断剂将有可能成为保护神经元免受apoE4伤 害的有效治疗策略之一。 关键词： 载脂蛋白E4；载脂蛋白E3； NMDA受体；皮层神经元；细胞内 钙水平；阿尔茨海默病 Effectsof IsoformsonNeuronal ApoE Cytoplasmic CalciumHomeostasis Abstract ective：The theacuteandc11romceffectsofdifferent Obj presentstud