重组人促红细胞生成素对高糖状态下体外培养视网膜神经细胞凋亡的保护作用和BcL-2蛋白表达的影响.pdfVIP

中文摘要 human 目的：探讨重组人促红细胞生成素(Recombinant 糖作用下体外混合培养大鼠视网膜神经细胞凋亡的保护作用及与Bcl．2蛋白表达的 影响。 方法：取出生1-3天大鼠，取其视网膜，通过0．125％胰蛋白酶消化制成单细胞悬 液，建立一个稳定可靠的体外培养视网膜神经细胞的方法，用台盼蓝染色观察不同 浓度葡萄糖对视网膜神经细胞形态、生长状态及存活数的影响，并采用免疫细胞化 学技术对视网膜神经细胞进行鉴定。将体外混合培养3天的原代大鼠视网膜神经细 胞随机分为高糖培养组、对照组和各浓度rhEPO处理组，rhEPO处理组在高糖培养 评价在培养液中加入rhEPO对高糖损伤视网膜神经细胞活力的影响，同时采用免疫 细胞化学半定量方法，检测不同浓度rhEPO处理后高糖损伤神经细胞中Bel．2蛋白 的表达水平。 结果：免疫细胞化学染色显示，体外培养的细胞大部分抗NSE抗体反应呈阳性，该 方法培养的神经细胞纯度可达到90％以上。在高浓度葡萄糖条件下，体外培养的视 网膜神经细胞活性下降，且细胞大量凋亡，本试验对不同浓度的葡萄糖以及不同干 预时间的神经细胞活性进行比较，选取30retool／L葡萄糖干预48小时的条件来制 备神经细胞高糖模型。经rhEPO处理后的结果表明，外源性应用rhEPO对神经细胞 表达(氏0．05)，而且具有时间和浓度依赖性。 结论：rhEPO处理可以保护体外培养的高糖状态下的视网膜神经细胞的凋亡，且具 有浓度和时间依赖性，并能显著增强Bcl．2蛋白的表达，提示Bcl．2蛋白的高表达可 能是rhEPO保护视网膜神经细胞凋亡的作用机制之一。 硕士研究生 王云霄(眼科学) 指导教师孟岩 教授 关键词：重组人促红细胞生成素；视网膜神经细胞；细胞凋亡；Bcl-2 ProtectioneffectofrhEPOto ofretinalcellsin apoptosis nerve high and ofBcl一2invitro glucoseexpression Abstract To the effectsofRecombinantHuman objectiveinvestigateprotective ofretinalon retinalnervecellsmixedculturedin (rhEPO)toapoptosis apoptosis hi．gh invitroandthe ofBcl-2． glucose expression nerve MethodsAstableandreliablemethodtocultureretinal cells bytrypsin(0．125％) retinaesofrats 1-3 in blue the digstiondissecting postnatal vitro．Trypanstaining days wasusedtoobservethe conditionandsurvivalstatusofnervecells modality,grewing of