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重组溶瘤腺病毒 RCAdC68.pIX-EGFP 的构建及其对结肠癌细胞增殖的影响 中文摘要 重组溶瘤腺病毒 RCAdC68.pIX-EGFP 的构建 及其对结肠癌细胞增殖的影响 中文摘要 目的 本实验通过等温组装法构建重组溶瘤腺病毒 RCAdC68.pIX-EGFP ，并通 过比较 RCAdC68.pIX-EGFP 与复制缺陷型重组腺病毒 AdC68-ΔE1-EGFP 对结肠癌细 胞的杀伤作用，初步观察 RCAdC68.pIX-EGFP 对结肠癌细胞增殖的影响。 方法 以黑猩猩型腺病毒AdC68 为模板，利用等温组装法构建腺病毒衣壳蛋白 pIX 展示 EGFP 的重组溶瘤腺病毒质粒， HEK293 细胞中包装成完整病毒并扩增、纯 化 ， 获得具有 溶瘤 效应可表达 EGFP 的重组溶瘤腺 病毒 载体 ，命名为 RCAdC68.pIX-EGFP 。以不同的病毒剂量 （100、500、2500 、12500vp/cell）感染结肠 癌细胞 HCT 116 、NCI-H508 、H -29 及人胚肾细胞 HEK-293 ，分别于感染后第 3、5、 7 天用 M 法检测 RCAdC68.pIX-EGFP 对不同细胞的抑制率，结晶紫染色实验检测 RCAdC68.pIX-EGFP 对不同细胞的杀伤作用，荧光显微镜与相差显微镜观察细胞形态 学变化和病变情况。 结 果 重 组 溶 瘤 腺 病 毒 载 体 RCAdC68.pIX-EGFP 构 建 成 功 。 RCAdC68.pIX-EGFP 对结肠癌细胞 HCT116 、NCI-H508 、H -29 的增殖抑制作用与病 毒感染剂量及感染时间成正比，以 500vp/cell 病毒感染剂量感染细胞 7 天后， RCAdC68.pIX-EGFP 对 HCT 116 、NCI-H508 、H -29 、HEK293 细胞的抑制率分别为 86.70%、96.85%、99.70%、99.99%，AdC68-ΔE1-EGFP 的细胞抑制率分别为 6.57%、 11.46%、9.11%、99.99%，RCAdC68.pIX-EGFP 与 AdC68-ΔE1-EGFP 对结肠细胞增殖 抑制作用的差异有统计学意义 （P ＜0.05 ），而对 HEK-293 细胞增殖抑制作用的差异 无统计学意义 （P ＞0.05 ）。 结论 本研究成功构建重组溶瘤腺病毒载体 RCAdC68.pIX-EGFP ， RCAdC68.pIX-EGFP 能显著抑制结肠癌细胞 HCT 116 、NCI-H508 、H -29 的增殖，初 I 中文摘要 重组溶瘤腺病毒 RCAdC68.pIX-EGFP 的构建及其对结肠癌细胞增殖的影响 步显示出 RCAdC68.pIX-EGFP 作为溶瘤病毒载体治疗肿瘤的潜能。 关键词 溶瘤腺病毒；等温组装；结肠癌；细胞增殖 作 者：石 鑫 指导老师：常树建 II 重组溶瘤腺病毒 RCAdC68.pIX-EGFP 的构建及其对结肠癌细胞增殖的影响 英文摘要