重组腺病毒-胸苷激酶自杀基因前药系统对鼻咽癌CNE-2细胞放射增敏作用的体外实验探究.pdfVIP

／嬲煳炒 重组腺病毒一胸苷激酶自杀基因前药系统对鼻咽癌CNE．2细 胞株放射增敏作用的体外实验研究 摘 要 目的：本实验利用进入II期临床试验的重组腺病毒一胸苷激酶 (Adenovirus．thymidine kinase／ of 放射增敏作用。方法：分别用不同感染复数(Multiplicity 培养基，继续培养72h，倒置显微镜下观察转染前后细胞形态变化， 癌CNE．2细胞，继续培养72h，倒置显微镜下观察细胞存活情况， WST-1检测不同浓度GCV作用下的细胞存活率。选取对鼻咽癌 CNE．2细胞无明显毒性作用的MOI为100作为下一步实验研究，转 染鼻咽癌CNE．2细胞，3h后更换新鲜培养基，继续培养24h，用不 同浓度GCV作用，继续培养72h，倒置显微镜下观察细胞存活情况， 1 及IC0进行放射增敏实验，实验分单纯放疗组、ADV-TK+放疗组、 GCV+放疗组、ADV-TK／GCV+放疗组：MOI为100的ADV-TK转染 Y射线照射，每 48h，四组分别给予0、O．5、1、2、3、4、6、8、10Gy 个照射剂量组设三个培养皿，照射后立即更换新鲜培养基，继续培养 14d后，观察各不同处理组对CNE．2细胞的杀伤作用，计算克隆形成 率、细胞存活分数，用单击多靶数学模型进行曲线拟合作图，计算放 射增敏比。结果：倒置显微镜下观察ADV-TK基因转染后的鼻咽癌 CNE．2细胞体积较对照组增大，轮廓较模糊，边界欠清，细胞内出现 较多粗大的黑色颗粒样物质，主要集中于细胞核内，而未转染 98．21％，MOI为1000时存活率为85．97％，MOI7 1000时对鼻咽癌 细胞存活率分别为98．38％311 细胞具有明显的抑制作用。选取MOI为100转染鼻咽癌CNE．2细胞， 性。放射增敏实验，单纯照射组：DO值为1．238 Gy，Dq值为2．838Gy， Gy， 2 因前药系统对鼻咽癌CEN．2细胞有明显的杀伤作用，并具有GCV浓 明显放射增敏作用。 关键词：鼻咽癌；腺病毒一胸苷激酶；自杀基因疗法；放射增敏 InVitro ofRadiation Effectof ExperimentsStudy Sensitizing kinasesuicide on geneprodrugsystem Adenovirus-thymidine Hunman CarcinomaCellLine CNE一2 Nasopharyngeal Abstract this recombinationadenovirus study,used thymidine Objective：In haveintoPhaseIIclinicaltrialstotransfec