重组腺病毒介导的PSMA4-1BBL转染树突状细胞体外诱导抗前列腺癌的实验探究.pdfVIP

·中文论著摘要· 重组腺病毒介导的PSMA／4．1BBL转染树突状细胞体 外诱导抗前列腺癌的实验研究 目 的 DC构建成DC疫苗，体外实验观察此DC疫苗呈递前列腺特异性膜抗原及活化T 细胞的能力是否增强，另用其诱导细胞毒性T淋巴细胞(CTL)生成，观察其对前 列腺癌的治疗效果，为下一步应用于体内实验奠定了基础。 方 法 一、PSMA和4．1BBL腺病毒质粒的构建及鉴定 滴度，并用PCR法鉴定两种基因的表达。 二、健康志愿者外周血单个核细胞(PBMC)来源的树突状细胞体 外诱导及其体外感染腺病毒效率的测定 分离健康志愿者外周血PBMC，加入不同细胞因子体外诱导扩增培养DC，培 12，24，48h荧光倒置显微镜下观察同一MOI下绿色荧光蛋白(OFP)的表达； 凋亡和坏死试剂盒检测不同MOI下DC细胞的存活情况，摸索最适MOI。 三、树突状细胞感染PSMA／4．IBBL基因重组腺病毒后的免疫功 能变化 分离健康志愿者外周血PBMC，加入不同细胞因子体外诱导扩增培养DC、T， DC组、Ad．PSMA．DC组、Ad-4．1BBL．DC组、Ad．GFP．DC组和普通未转染DC 组，荧光倒置显微镜观察DC的形态学变化，培养48h后Western Blotting法鉴定 PSMA与4．1BBL基因在DC中的表达，直接免疫荧光法检测未感染DC与腺病毒 DC疫苗培养上清中IL．12分泌量的变化。混合淋巴细胞反应测定不同组DC疫苗 对T细胞增殖的影响，另外可确定DC与T细胞共培养的最佳细胞比例。ELISA 22RV)的杀伤活性。 结 果 Ad．PSMA滴度为2x1010 pfu／ml，Ad-4．1BBL滴度为1．2x1010pfu／ml。 2、同一MOI下转染48h后转染效率最高，另确定最佳MOI为200。 3、PSMA和4．1BBL蛋白可以在DC上正常表达，腺病毒感染后不会影响DC pg明显高于单个转染组及未转染组(尸0．05)；DC：T同一比例下，共转染组刺激 自体T细胞增殖能力明显高于其他转染组及未转染组(尸0．05)，各组DC疫苗 1176．10-a：14．37pg／2×106cells，IL-10分泌量最低，为75．14+2．01pg／2x106cells，与其 他各组比较，差异具有统计学意义(尸0．05)；效靶比为40：1时肿瘤杀伤作用最 杀伤率俨0．05)。 ， 结 论 2 刺激和增强PSMA特异效应细胞对PSMA阳性表达前列腺癌细胞的杀伤作用；两 种肿瘤相关抗原感染DC较以单一肿瘤相关抗原能更有效诱导肿瘤特异性CTL。 关键词 树突状细胞；PSMA；4．1BBL；细胞毒性T淋巴细胞；前列腺癌 3 ·英文论著摘要· The effectofhumandendritic immunotherapeutic cellstransfectedwithPSMAand4．1BBLrecombina． on cancerinvitro ntadenoviruses prostate ective Obj the vaccinetransfectedwithPSMAand4-1BBLrecombinant WeconstructedDC theserecombinantDCstoelicitPSMA·directed adenovirus