重组腺病毒载体CRT构建以和联合紫杉醇对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、周期和凋亡的影响.pdfVIP

·中文论著摘要· 重组腺病毒载体CRT构建以及联合紫杉醇对 乳腺癌细胞MDA．MB．231增殖、周期及凋亡的影响 目 的 构建钙网织蛋白基因重组腺病毒载体(Ad．CRT)及联合紫杉醇对人乳腺癌细 胞株MDA．MB．231体外生长增殖的影响，诱导凋亡的效应及阻滞细胞周期的影 响，判断Ad．CRT与紫杉醇联用对人乳腺癌细胞系MDA．MB一231是否具有协同作 用，并初步探讨其可能机制。 方法 根据Genbank中提供的CRT基因序列，设计并合成引物，以人乳腺癌组织 内切酶线性化的腺病毒载体pAdxsi；分别将不同处理因素作用于体外培养的人乳 腺癌细胞株MDA．MB．231，MTT法检测各组处理因素对细胞生长抑制作用；PI 单染流式细胞术检测各组处理因素对细胞周期和凋亡的影响。 结果 构建成功。Ad．CRT转染293LP细胞并通过Westernblot法和Real．timePCR法证 实其体外表达。 2、Ad．CRT与紫杉醇对人乳腺癌细胞株MDA．MB．231生长抑制的影响 联合用药组在72h之前与单纯紫杉醇和单纯Ad．CRT作用效果无明显差异，但 最为明显，且随时间的增加联合用药组的抑制率均比单纯紫杉醇组和单纯Ad．CRT 组的抑制率高。 影响 与空白对照组相比，各处理组抑制细胞周期的百分比均升高，联合用药组 著阻滞细胞周期并且促进细胞的凋亡(P0．05)。 结论 1、成功构建CRT重组腺病毒载体Ad．CRT并证实其在293LP细胞中表达。 2、Ad．CRT联合紫杉醇能增强抑制乳腺癌细胞MDA．MB．231增殖，且成时 间依赖关系。 3、Ad．CRT联合紫杉醇能够阻滞细胞周期、诱导细胞凋亡。 关键词 重组腺病毒载体CRT，紫杉醇，乳腺癌，增殖，凋亡； 2 ·英文论著摘要· ConstructionlOsuriofvRecombinantRonedA for10rLKlCRT effectsofrecombinantadenovirusAd—-CRT and plus on andcell cell growth、cellcycle apoptosis paclitaxel ofBreastCancerCellLineMDA．MB．231 ective Obj Theaimofthe wastoconstructarecombinant study adenovirusforcalreticulinand its in293LP．To theeffects assayexpression investigate recombinantadenovirusAd—CRT oncell andcell of pluspaclitaxelgrowth、cellcycle Breast 1． of CancerCellLineMDA—MB-23 apoptosis Methods ThecDNAforCRTWas TouchDownRT-PCR itwas