重组表达质粒pAcGFP1-IRES2-Bcl2的构建和大鼠胚胎神经干细胞转染的实验研究.pdfVIP

大鼠胚胎神经干细胞转染的实验研究 硕士生姓名： 于向阳 专旨导教师： 徐英辉教授 专业名称： 神经外科学 i爱 摘 ，C 如今大量研究证实，细胞凋亡参与了中枢神经系统多种疾病(如卒中、脑外伤) 后的细胞死亡，并与继发性脑功能障碍密切相关。B细胞淋巴瘤／自血病．2(B．cell 作用。在神经干细胞移植技术日渐成熟的基础上，结合基因工程技术使外源性 Bel．2在神经干细胞中过量表达，可以增强干细胞在移植部位不良微环境下的耐受 能力，有效抑制凋亡的发生，从而提高移植后神经干细胞的存活率，为以后细胞 与周围神经组织的整合以及神经功能的恢复打下良好的基础。本实验旨在构建一 eoeruleseensfluorescent 种含有Bcl．2和水母绿色荧光蛋白(Aequoreagreen protein， NeuralStem 胚胎皮质神经干细胞(Cortex．Derived 系统疾病的研究奠定基础。 因修饰的大鼠胚胎皮质神经干细胞(cNSCs)。 Vector中，经PCR．凝胶电泳和测序分 的eDNA，纯化后克隆到载体pMDl9一T Simple 析对重组克隆质粒pMDl9．Bcl2进行鉴定，再将质粒上的目的基因亚克隆到真核表 2000将重组 当传至第三代时进行免疫荧光鉴定；采用阳离子脂质体Lipofectarnine 达． SD胎鼠的脑皮质分离出的细胞能在培养基中稳定增值并连续传代，免疫荧光鉴定 分化为神经元、神经胶质细胞和少突胶质细胞，证明培养的细胞是神经干细胞： 在干细胞中正确表达。 的方式建立了Bcl．2和AcGFPl基因修饰的大鼠胚胎皮质神经干细胞，为下一步开 展细胞移植治疗卒中、脑外伤等中枢神经系统疾病的研究奠定基础。 关键词： Bcl．2质粒神经干细胞转染 2 onConstructionofRecombinant Experimental Study Plasmid andIts pAcGFPI--IRES2-Bcl2 inNeuralStemCells Expression Master candidate：Yu degree Xiangyang Xu Supervisor：ProfessorYinghui Major：Neurosurgery Abstract NumerousstudiesnOWconfirmthat involvedin ofnervous apoptosis variety brain relatedto brain systemdiseases(eg．stroke，traumaticinjury)and secondary