重组腺病毒介导的白细胞介素23基因转染人肝癌hepG2细胞的实验研究.pdfVIP

重组腺病毒介导的白细胞介素23基因转染人肝癌 hepG2细胞的实验研究 硕士研究生： 高王军 专旨导教师： 谭 广 教授 专业名称： 外科学 摘 要 目的：肝癌是最常见的恶性肿瘤之一。手术、化疗、放疗效果均难 令人满意，严重威胁人们的生存健康，追切需要探索新的治疗方法。近几 年来免疫治疗和基因治疗为肝肿瘤的治疗开辟了新的途径。利用细胞因 子相关的多种方法治疗肿瘤逐渐成为热点。白细胞介素l2(IL．12)已被 证明在小鼠中能抑制原发性和转移性肝脏肿瘤，而作为IL．12同家族成 员，新发现的细胞因子白细胞介素23(IL．23)对结肠癌、黑色素瘤、乳 腺癌、食道癌、胰腺癌等都有较强的抑制作用，结果令人鼓舞，且毒性 较IL．12低，为临床使用提供了更为安全的途径。目前，IL．23对肝癌的 动物实验也取得了较为满意的疗效，但其在体外是否对肝癌细胞有直接 毒性作用，以及是否诱导细胞凋亡还不清楚。本实验通过研究重组腺病 癌hepG2细胞的作用机理，为临床应用IL．23治疗肝癌提供理论基础。 方法：传代培养人肝癌hepG2细胞，用携带人IL．23和增强型绿色 数(MOI)10、50、1 细胞作对照，24小时后分别在荧光及倒置显微镜下观察细胞，并用流式细 胞仪测转染效率，确定最佳感染复数(MOI)。然后以最佳MOI IL．23(P1 转染组hepG2细胞增殖．PI(碘化丙碇)染色后流式细胞仪测不同时间点 (24、48小时)各组细胞凋亡率。统计学处理：实验数据以均数±标准 l 差表示，采用SPSS1．5软件包进行单因素方差分析，以尸O．05表示统计 学差异。 00 10(29．71±3．48％)、50(58．17 时，转染效率为91．63±4．83％，与MOI 200(92．8± ±6．27％)组相比差异有统计学意义，P0．05，而与MOI MTT法分别检 RT．PCR可检测到IL．23(Pl9和p40)mRNA的表达。 IL．23 转染组hepG2细胞增殖，见三组细胞均生长良好，生长曲线基本重合， 未见明显抑制，差异无统计学意义，PO．05。流式细胞仪分析不同时间 点(24、48小时)各组细胞凋亡率，差异无统计学意义，尸0．05。 结论：携带IL．23基因的重组腺病毒可以高效转染人肝癌HepG2细 胞，并在细胞内表达IL．23(P1 adv．EGFP转染组以及对照组hepG2细胞生长率，凋亡率比较均无统计学 差异，反映IL．23自身可能对hepG2细胞并无直接毒性作用，体外转染 如果不经免疫细胞介导则不影响细胞的凋亡及生长。这与文献报道的 IL．23体外转染不影响结肠癌及乳腺癌等其它肿瘤细胞生长的结果相同， 也间接证明IL．23的抗肿瘤作用主要是经免疫细胞介导的，主要靠激活 THl反应和CTL起作用。 关键词：重组腺病毒 白细胞介素23HepG2细胞 Recombinant IL一23 TheEffectof onHuman CacinomaCells Hepatocellur HepG2 Master candidateGaoun degree Wangj Tan Guang Supervis