第六讲 抗生素质量康呢制.ppt

第三章 抗生素; 第五节抗生素质量控制;二 鉴别试验;【鉴定】沉淀反应 取本品10mg，加硝酸0.5ml使溶解，加水0.5ml，火焰加热（灼烧）2分钟，放冷，滴加硝酸银试液，即生成白色凝乳状沉淀;三 一般项目检查;异常毒性 系将一定剂量的供试品溶液注入小鼠体内或口服给药，在规定时间内观察小鼠死亡情况，以判定供试品是否符合规定的一种方法。 热原 将一定剂量的供试品，静脉注入家兔体内，在规定时间内，观察家兔体温升高的情况，以判定供试品中所含热原的限度是否符合规定。 采用“鲎(hou)试剂（内毒素检测试剂）”法检查。;降压物质、升压物质 无菌试验： 指检查药品、敷料、缝合线、无菌器具及适用于药典要求无菌检查的其他品种是否无菌的一种方法。 微生物限度检查： 检查非规定灭菌制剂及其原、辅料受微生物污染程度的方法。检查项目包括细菌数、霉菌数、酵母菌数及控制菌检查。 ;杂质 毒性杂质 非毒性杂质 溶出度 不溶性颗粒;【杂质检查】--液相色谱 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂； 以磷酸盐溶液-乙腈（40：60）为流动相； 波长为215nm。 按红霉素C、红霉素A、红霉素B的顺序出峰。 另取红霉素标准品适量，130℃加热破坏4小时，液相色谱分析。 记录色谱图至红霉素A保留时间的5倍。按红霉素C、红霉素A、杂质1、红霉素B、红霉素烯醇醚峰的顺序出峰。杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积（5.0%）。;四、含量测定;（1）含量测定—液相色谱 分别加甲醇溶解，用磷酸盐缓冲盐（pH7.0）-甲醇（15︰1）定量稀释制成溶液，分别作为供试品溶液和标准品溶液；精密量取供试品溶液与标准品溶液各20ul，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算供试品中红霉素A的含量。药典规定：按无水物计算，不得少于88.0%。 ;（2）、抗生素类药物含量的理化测定法 抗生素类药物含量分析测定方法分为理化方法和生物学方法. 理化方法以化学、物理化学方法测定主药含量，准确度高、简单、快速，但不一定代表生物效价，且易受杂质干扰。 生物学方法主要是通过测定抗生素抑菌或杀菌的能力来表达其效价，与临床效果一致，灵敏???高，干扰物质少，但操作繁琐、培养时间长、测定误差大。;例 青霉素钠 Ch.P（2000） 【鉴别】（1）取本品与已知含量的青霉素适 量，分别加水制成每1ml中约含50mg的溶液，各 取1ml，加入不少于200单位的青霉素酶溶液1ml, 在37℃灭活1小时后，取灭菌滤纸片，分别用上述 溶液浸湿后，用滤纸吸去多余的液体，置摊布金 黄色葡萄球菌 [CMCC（B）26003] 的培养基上。 在37℃培养约16小时后均无抑菌作用，而用同一 方法检查未经青霉素酶灭活的溶液均有抑菌作用.;例1 青霉素含量的测定 青霉素在水溶液中经水解后，产生青霉噻唑酸，可用酸碱滴定法测定。或用直接滴定法，或用逆滴法进行测定，最后均以碱标准溶液的消耗量来计算青霉素的含量。;终点观察：用目视指示剂或电位滴定均可。 温度对指示剂的变色范围有影响。碱性指示剂，温度升高时，对氢离子的灵敏度降低，变色范围偏向较低的pH值，如甲基橙在室温时为pH 3.1～4.4，在100℃时，移到2.5～3.7。酸性指示剂对温度的影响不太敏感。 指示剂的用量不宜多，过多时，因指示剂本身也消耗酸或碱，变色较慢。 在水溶液中，大部分羧酸在pH约8.4时中和，一般可用酚酞指示剂（无色到红色），也可采用百里酚酞（无色到蓝色）或百里酚蓝（黄色到蓝色）等。;滴定剂的选择，一般选用氢氧化钠或氢氧化钾标准溶液作滴定剂。 标准碱液一般采用新沸冷却蒸馏水进行稀释制备。 贮存标准碱液的容器要密封，以免吸收二氧化碳而影响碱液质量。;例2 青霉素钠的含量测定 精密称取本品约0.3～0.4g，加新沸过的蒸馏水20mL使其溶解，加0.01mol/L氢氧化钠液中和后，精密加0.1mol/L氢氧化钠液25mL，95℃左右水浴20min。 冷却后，加酚酞指示剂2滴，用0.1mol/L盐酸滴定，从粉红色至无色。 不加供试样品作为空白，重复以上操作。 两者滴定数的差即为所消耗氢氧化钠的量。;计算： 式中，MHCl表示0.1mol/L盐酸液的准确摩尔数；A表示供试品滴定所需0.1mol/L盐酸液体积（mL），B表示空白滴定所需0.1mol/L盐酸液体积（mL）。 讨论：水解前先中和溶剂和样品；空白试验校正（消除CO2干扰）；加热时避免吸收CO2。 ;用于含量测定的方法有下述几种： A、对照品比较法 按药典规定的方法，分别配制供试品和对照品溶液，对照品溶液中所含被测成分的量应为供试品溶液中被测成分标示量的100％+10％。 所用溶剂完全一样，在规定的波长