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第三章 蛋白质 第一节：蛋白质概论 第二节：氨基酸 第三节：蛋白质的结构 第四节：蛋白质的理化性质 第五节：蛋白质的分离鉴定 第六节：蛋白质工程 第三节 蛋白质的结构 蛋白质的结构 一级结构：肽链中氨基酸的排列顺序； 二级结构：多肽链本身的折叠方式； 三级结构：螺旋肽链结构盘绕、折叠成 复杂的空间结构； 四级结构：蛋白质亚基聚合成大分子蛋 白质的方式； 蛋白质的结构层次： 一级结构→二级结构→超二级结构→结构域→三级结构→四级结构 一、蛋白质的一级结构 一、蛋白质的一级结构 1、肽的一般概念 肽：是一个氨基酸的α-羧基和另一个氨基酸分子的α-氨基之间脱去一分子水而通过肽键连接成的化合物。 肽键：一个氨基酸的α-羧基和另一个氨基酸分子的α-氨基缩合是区水而形成的酰胺键。 R1 R2 R3 R4 Rn H2NCHCONHCHCONHCHCONHCHCO………NHCHCOOH 肽链，氨基酸残基, 主链，侧链 N—末端：含有自由氨基的一端，书写用H表示； C—末端：含有自由羧基的一端，书写用OH表示； 一、蛋白质的一级结构 1、肽的一般概念 一、蛋白质的一级结构 1、肽的一般概念 一、蛋白质的一级结构 1、肽的一般概念 2、肽的命名及表达式 例如：H.Tyr.Gly.Gly.Phe.Met.OH（甲硫氨酸型脑啡肽） （1）用结构式来表示，占空间大； （2）用氨基酸中文名称的字头表示； （3）用氨基酸英文名称的三字符或单字符表示； （4）二肽，三肽，多肽 3、蛋白质的氨基酸序列和功能 （1）蛋白质的一级结构决定了高级结构和功能。 （page94图3-11） 4、蛋白质一级结构的测定 世界上第一个氨基酸序列的测定是，1953年由Sanger完成，他用10年的时间测定了含有51个氨基酸残基的牛胰岛素。 我国1965年在世界上第一个用化学方法人工合成的蛋白质就是这种牛胰岛素。 4、蛋白质一级结构的测定 测定蛋白质一级结构的要求: 1.样品必需纯（97%以上）。 2.知道蛋白质的分子量。 3.知道蛋白质由几个亚基组成。 4.测定蛋白质的氨基酸组成；并根据分子量计算每种氨基酸的个数。 5.测定水解液中的氨量，计算酰胺的含量。 4、蛋白质一级结构的测定 Sanger法氨基酸序列测定的大体步骤为： （一）蛋白质亚基数目的确定及其拆分 （二）多肽链的局部断裂和肽段的分离 （三）各个肽段氨基酸序列的测定 （四）氨基酸完整序列的拼接 （五）多肽链中二硫键位置的确定 4、蛋白质一级结构的测定 （一）蛋白质亚基数目的确定及其拆分 1、蛋白质分子中亚基数目的确定 2、蛋白质分子中亚基的拆分 3、多肽链的氨基酸组成测定 4、多肽链的N-末端和C-末端分析 4、蛋白质一级结构的测定 N-末端分析： （1）二硝基氟苯法（FDNB法）： （2）丹磺酰氯法（DNS法）： （3）苯异硫氰酸酯法（PITC法）： （4）氨肽酶法 C-末端分析： （1）肼解法： （2）还原法： （3）羧肽酶法： 4、蛋白质一级结构的测定 N-末端分析： （1）二硝基氟苯法（FDNB法）： 4、蛋白质一级结构的测定 N-末端分析： （2）丹磺酰氯法（DNS法）： 4、蛋白质一级结构的测定 N-末端分析： （3）苯异硫氰酸酯法（PITC法、Edman降解法）： 4、蛋白质一级结构的测定 N-末端分析： （4）氨肽酶法 4、蛋白质一级结构的测定 C-末端分析： （1）肼解法： 4、蛋白质一级结构的测定 C-末端分析： （2）还原法： 4、蛋白质一级结构的测定 C-末端分析： （3）羧肽酶法： 4、蛋白质一级结构的测定 （二）多肽链的局部断裂和肽段的分离： 多肽链的局部断裂方法主要有酶裂解法和化学裂解法两种，其中酶裂解最常用。 酶裂解法： 通常是选择专一性很强的蛋白酶来完成的。例如胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、嗜热菌蛋白酶、胃蛋白酶、糜蛋白酶（专一性看page101）等。 多肽链经部分水解后，即降解成长短不一的较小肽段，这些肽段可以应用层析和电泳加以分离和提纯。 4、蛋白质一级结构的测定 （三）各个肽段氨基酸序列的测定： 氨基酸肽段序列的分析方法有： 1、Edman降解法： 2、酶解法： 3、气相色谱-质谱联用法： 4、蛋白质一级结构的测定 （四）氨基酸完整序列的拼接 4、蛋白质一级结构的测定 （五）多肽链中二硫键位置的确定 一般可用蛋白酶或酸直接水解原来的蛋白质，从部分水解产物中分