第五章残留农药检测方法液相色谱法.ppt

第五章 残留农药的检测方法-液相色谱法 高效液相色谱法是现代农药残留分析不可缺少的手段。高效液相色谱仪也是农药残留分析实验室必备的仪器设备。 解决了热稳定性差，难于气化、极性强的农药残留分析问题。高效液相色谱法技术的进步，目前已经不仅仅是气相色谱法的重要补充和多残留分析方法的一种重要选择，而是随着高灵敏、通用型检测器的成功开发并应用，有希望胜任绝大多数农药残留分析任务。 1. 高效液相色谱法的特点 高速 由于使用高压泵输送流动相；采用梯度洗脱装置；用检测器在柱后直接检测洗出液成分等原因，HPLC完成分离分析的时间只需几分钟到几十分钟，比经典液相色谱法要快得多。 高灵敏度 紫外、荧光、电化学等高灵敏度检测器的使用，使HPLC的灵敏度可与气相色谱法媲美。 高度自动化 现代先进的高效液相色谱仪配有计算机，不仅能够自动处理数据、打印分析结果，而且能够对仪器的全部操作包括流动相的选择、流速、柱温、检测器波长选择，以及进样、梯度洗脱方式等进行程序控制，成为全自动化的仪器。 不受分析试样挥发性和相对分子质量的限制，可用于分离高沸点、相对分子质量大、热稳定性差的农药残留及其代谢物的检测。 2.原理 液相色谱法主要被分成两个类型：平面色谱（薄层色谱和纸色谱）和柱色谱。 柱色谱可分为经典柱色谱（低压）和高效液相色谱（高压）。 高效液相色谱法又可分为4种主要类型： 液固吸附色谱法（LSC）； 液液分配色谱法（LLC）， 主要是键合相色谱 法（BPC）； 离子交换色谱法（IEC）； 空间排阻色谱法（SEC）。 与经典的柱色谱法不同，高效液相色谱法采用高压泵，填充微粒固定相的短柱，并且随着组分的流出检测器就可以将样品的浓度记录下来。 高效液相色谱法原理与经典的柱色谱法相同，它的进步主要依赖于色谱仪硬件的开发。高压泵能保证当压力不断升高的情况下，流量的精度没有变化，同时有大量的各种类型和规格的色谱柱供选用。 液液色谱的特点： ①.可使用多种溶剂，固定液抗冲刷能力强，不需要预饱和，再现性能非常稳定。 ②.分离适用性广，从非极性化合物到极性化合物，都可以作其分离对象。 ③.为改善分离度可以进行梯度洗脱，能做高精度定量分析。 基于这些特点，液液分配色谱法广泛地用于各种样品中农药残留量的分析测定。 建立农药残留分析的高效液相色谱方法，选用哪种分离模式取决于被分析农药的结构、性质以及对样品中所含有的干扰物质的分离。 一般讲，高效液相色谱法分析测定农药残留量以液液分配色谱的键合相色谱法最为常用。 3. 基本流程 高效液相色谱仪由输液系统、进样系统、分离系统、检测系统、控制和数据处理系统组成 4.相关技术 1）脱气 流动相脱气是非常重要的，因为流动相中溶解的空气在低压部件，如检测器里会逸出气泡来，气泡的出现会使检测器的噪声加大。若气泡吸入高压泵液缸，会导致压力不稳或停工。 脱气常用方法有： A. 真空脱气法 B. 超声波脱气法 C. 吹气脱气法， 2）梯度洗脱 梯度洗脱，就是将两种或两种以上的不同极性的溶剂进行混合，作为流动相使用，在进样过程中，连续不断地按预先拟定的程序改变流动相的浓度和极性。 典型的高压梯度洗脱程序 3）六通进样阀 4）溶剂处理技术 溶剂纯化 分析纯和优级纯溶剂 目前专供色谱分析用的“色谱纯”溶剂除最常用的甲醇外，其余多为分析纯，有时要进行除去紫外杂质、脱水、重蒸等纯化操作。 过滤 为了防止不溶物堵塞流路和色谱柱入口处的微孔垫片。 流动相都应用 0.45μ m 以下微孔滤膜过滤。滤膜分有机溶剂专用和水溶液专用两种。 5）衍生化技术 衍生化就是将用通常检测方法不能直接检测或检测灵敏度低的物质与某种试剂（衍生化试剂）反应，使之生成易于检测的化合物。 可分为柱前衍生和柱后衍生。 柱前衍生是将被测物转变成可检测的衍生物后，再通过色谱柱分离。这种衍生可以是在线衍生，即将被测物和衍生化试剂分别通过两个输液泵送到混合器里混合，并使之立即完成反应，随之进入色谱柱；也可以先将被测物和衍生化试剂反应，再将衍生产物作为样品进样；还可以在流动相中加入衍生化试剂。 柱后衍生是先将被测物分离，再将从色谱柱流出的溶液与反应试剂在线混合，生成可检测的衍生物，然后导入检测器。 6）联用技术 HPLC 的检测方法很多，这些检测方法进行定性和定量的前提是分离后的组分可以用对应的标准物质作参照。用标准物质作参照对未知成分进行定性确认往往要靠经验来缩小可能的对象物质，方法的可靠性也不是很高，而且在生物和医药等领域的研究中，很多有机化合物的标准物质难以获得。 液相色谱-质谱（ LC- MS ）很好地解决这个问题。 5.流动相 流动相是影响分离的一个重要调节因素。一种理想的液相色