ETEC对断奶腹泻仔猪胃肠道紧密连接蛋白ZO-1影响.pdfVIP

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2017-09-08 发布于安徽
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ETEC对断奶腹泻仔猪胃肠道紧密连接蛋白ZO-1影响.pdf

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ETEc对断奶腹泻仔猪胃肠道紧密连接蛋白Z0-1的影响目录摘要……………………………………………………………………………………．．I Abstract………………………………………………………………………………………………………………III 英文缩写词汇表…………………………………………………………………………V 第一部分文献综述………………………………………………………………………l l 仔猪断奶腹泻的机理研究进展……………………………………………………。1 1．1 仔猪早期断奶综合征……………………………………………………………1 1．2 早期断奶对仔猪胃、肠道黏膜屏障功能的影响………………………………2 2 断奶仔猪胃肠道紧密连接蛋白ZO．1的研究现状…………………………………4 3 肠毒素性大肠杆菌仔猪腹泻的研究进展…………………………………………．．4 3．1 病原………………………………………………………………………………………………………。4 3．2 ETEC肠毒素……………………………………………………………………．．5 4 Western免疫印迹法的研究进展及应用……………………………………………5 5 选题目的及意义………………………………………………………………………6 第二部分试验部分………………………………………………………………………7 试验I目的菌株ETEC肠毒素的检测…………………………………………………7 1 实验试剂及仪器……………………………………………………………………．．7 1．1 实验材料…………………………………………………………………………7 1．2 实验试剂…………………………………………………………………………7 1．3 实验仪器…………………………………………………………………………．7 2 实验方法………………………………………………………………………………7 2．1 ETEC纯培养……………………………………………………………………．．7 2．2 ETEC肠毒素的鉴定……………………………………………………………．8 2．2．1 大肠杆菌ETEC的DNA模板制备…………………………………………8 2．2．2 引物设计合成………………………………………………………………．．8 2．2．3 2．2．4 PCR产物的琼脂糖凝胶电泳鉴定……………………………………………．9 2．2．5 PCR产物酶切鉴定…………………………………………………………10 2．2．4 eDNA的PCR扩增反应……………………………………………………．22 2．2．5 PCR扩增及产物的回收测序………………………………………………。23 2．3 Western免疫印迹实验方法及步骤……………………………………………．23 2．3．1 胃粘膜、回肠、结肠组织总蛋白的提取…………………………………23 2．3．2 蛋白的SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳…………………………………………24 2．3．3 蛋白的免疫反应……………………………………………………………25 ETEC对断奶腹泻仔猪胃肠道紧密连接蛋白zo-l的影响 2．3．4 化学发光试剂检测…………………………………………………………。25 2．3．5 显影，定影……………………………………………………………………25 2．3．6 凝胶图象分析…………………………………………………………………．26 3 实验结果………………………………………………………………………………27 3．1 组织中总RNA的提取…………………………………………………………．．27 3．2 紧密连接蛋白ZO．1的PCR扩增结果…………………………………………28 3．2．1 ZO．1在胃黏膜中的PCR扩增结果………………………………………28 3．2．2 ZO．1在回肠中的PCR扩增结果…………………………………………28 3．2．3 ZO．1在结肠中的PCR扩增结果…………………………………………29 3．3 内参基因GAPDH的PCR扩增结果…………………………………………30 3．4 紧密连接蛋白ZO一1的实时荧光定量PCR检测结果………………………．