γ射线外照射预防兔股动脉再狭窄和其对细胞凋亡影响.pdfVIP

材料和方法 1实验对象 山西省畜牧研究所提供模型新西兰大耳白兔共30只，兔龄6．12个月，雄性，体重 60Co Y射线照射，0Gy组为对照组。 2实验器材与用品 (1)Theratron一780c型钴机：加拿大 (2)型模拟定位机：北京喻华机电新技术研究所 (3)恒温孵育箱：$648，上海 (4)MIAS．2000图像分析系统：四)IIN大智胜软件有限公司 (5)三星i6相机：韩国 (6)速眠新：(麻醉用)1．5ml／支，长春军事医学科学院军事兽医研究所 (7)青霉素钠：80万单位／支，哈药总厂 (8)庆大霉素：40万单位／支，山东鲁抗晨欣药业 (9)肝素钠：1．25万单位／支，天津生化药厂 (10)三氯化铁FeCl3：分析纯，国产 (11)DAB显色液：北京中山生物技术有限公司 SituCellDeathDetection (12)In Solution、Label Kit，POD：德国Roch公司(含Enzyme Solution、Converter—POD) (13)蛋白酶K工作液：德国Roch公司 (14)利多卡因：20ml／支 (15)10％PBS液：自制，山西医科大学分子生物实验室提供 (16)4％中性福尔马林：自制，山西医科大学分子生物实验室提供 (17)高脂饲料：0．5％胆固醇+5％猪油+15％蛋黄粉+糠麸等成份 3实验方法 3．1动物模型的建立： 化学方法损伤内皮细胞建立兔股动脉再狭窄的模型 (1)动物麻醉与固定 高脂饲喂新西兰大耳白兔2周后，用速眠新(O．1．0．2ml／kg)肌肉注射，麻醉满意后将兔 背位固定于手术台上，腹股沟部剪毛，常规消毒铺巾。 (2)分离股动脉 用手指触摸股动脉搏动，辨明动脉走向，在该处利多卡因局部麻醉并作方向一致长约 2 4—5cm的切口。用止血钳小心分离肌肉及深部筋膜，便清楚地暴露出股三角区。股动脉及 神经即由此三角区通过。股神经位于外侧，股静脉位于内侧，股动脉位于中间偏后。用止 血钳细心将股神经首先分出，再仔细分离股动脉，将股动脉与其他组织分离开，长约 2．2．5cm，勿伤及股动脉分支。 (3)股动脉局部注药：股动脉近心端及远心端分别用动脉夹夹住，在贴近远心端剪开 血管向心插入注射细针。用10％PBS液充分洗净封闭管腔内的血液，然后抽干，灌入 3％FeCl3溶液至管腔充盈，10分钟后再用10％PBS液冲洗。 (4)注药后处理：放开动脉夹，压迫止血，恢复血流，缝合组织和皮肤。最后体表作照 射标记。 (5)抗生素预防感染：创面铺洒青霉素钠粉剂40万单位，然后庆大霉素40万单位U／d， 肌肉注射，连用3天。 3．2Y射线外照射 (2)设野：由于兔股动脉的范围较小，深度较浅，采用1．0x3．0cm的长方形野进行照射， 沿动脉长轴方向为3．0cm，标记区应包入照射野。 (3)剂量：兔股动脉的深度一般为1．0—2．0cm，该射野在这个深度的处方剂量可由百分 (4)照射：将静脉麻醉的兔仰卧固定于手术台上，照射时首先通过模拟定位机确定股 动脉造模标记部位，确认照射范围。后将动物搬运到治疗室，调整源皮距到80cm，摆位照 射。 (5)监视：过程中通过监视器观察动物，全部动物照射过程中并未见任何移动。 (6)照射后处理：抗感染促伤口愈合，继续高脂饲料loog／d，喂养3周。 3．3取材 各组在照射后2l天用空气栓塞法处死，取照射区对应动脉段2．0cm，生理盐水冲洗后， 常规4％中性福尔马林固定，24小时后，常规脱水、透明、浸蜡、包埋等程序制成蜡块， 沿血管横断面做4pm厚的切片，每一标本连续切片8张，供HE染色和免疫组化试验用。 3．4普通染色(HE染色) (1)取材组织块，经固定后，常规石蜡包埋，4lma切片。 蒸馏水洗2min。 (3)苏木素染色5min，自来水冲洗。 (4)盐酸乙醇分化30s(提插数下)。 (5)温水(约50℃)浸泡5min。 (6)置伊红液2rain。