2015年公开课讲课用微生物的实验室培养.ppt

2.培养基的种类 包器材 获得纯净培养物的关键是什么？ 二、无菌技术 防止外来杂菌污染 1. 目的： 2. 方法： 消毒与灭菌 消毒与灭菌的概念和区别？ 　（１）消毒定义： 　　利用较为温和的化学或物理方法，杀死大部份致病微生物的过程。 2.消毒与灭菌的概念及两者的区别 　　（2）灭菌的定义： 　　以强烈的化学剂或物理方法消灭所有微生物，包括所有细菌的繁殖体、芽孢、霉菌及病毒，而达到完全无菌之过程。 灭菌与消毒技术是微生物有关工作中最普通也是最重要的技术。 1、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min 2、巴氏消毒法：70-75 ℃下煮30min 或80 ℃ 下煮15min 3、化学药剂消毒法:用70%酒精、新 洁尔灭等进行皮肤消毒;氯气消毒水源 4、紫外线消毒 …… (1)消毒的方法： 3.常用的消毒与灭菌的方法 1、灼烧灭菌 (2)灭菌的方法： 2、干热灭菌： 160-170 ℃下加热1-2h。 3、高压蒸汽灭菌： 100kPa、121 ℃下维持15-30min. 最常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌，它可以杀灭所有的生物，包括最耐热的某些微生物的休眠体，同时可以基本保持培养基的营养成分不被破坏。 有些玻璃器皿也可采用高温干热灭菌。为了防止杂菌，特别是空气中的杂菌污染，试管及玻璃烧瓶都需采用适宜的塞子塞口，通常采用棉花塞，也可采用各种金属、塑料及硅胶帽，它们只可让空气通过，而空气中的其他微生物不能通过。 培养基分装完毕以后，在管口上加一个棉塞。棉塞能防止杂菌污染，保证通气良好，加棉塞时，应使棉塞长度的2／3在试管口内，如上图所示。 加棉塞 高压蒸气灭菌的原理是（ ） A．高压使细菌DNA变性 B．高压使细菌蛋白质凝固变性 C．高温烫死细菌 D．高温使细菌DNA变性 B 关于灭菌和消毒的不正确的理解是 A．消毒和灭菌实质上是相同的 B．灭菌是指杀死环境中的一切微生物 的细胞、芽孢和孢子 C．接种环用烧灼的方法灭菌 D．常用灭菌方法有加热法、过滤法、红外线法、化学药品法 A 1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？ 2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。 （1） 培养细菌用的培养基与培养皿 （2） 玻棒、试管、烧瓶和吸管 （3） 实验操作者的双手 答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。 答：（1）、（2）需要灭菌；（3）需要消毒。 2.无菌范围： 实验操作空间消毒 操作者的手、衣着消毒 实验用具灭菌 实验操作过程 二.无菌技术： 防止外来杂菌的污染 1.消毒与灭菌： 酒精灯旁操作 超净工作台 三、实验操作（大肠杆菌的纯化培养） （一）制备牛肉膏蛋白胨培养基（用于培养细菌） 1．计算、称量 2．溶化 3．调pH：　pH7．6　 4．分装：分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。 5．加塞 6．包扎 操作步骤 包器材 7．灭菌: 将装有培养基的三角锥瓶，塞上棉花塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭菌锅，在压力为100kPa、温度为121℃，灭菌15～30min。将培养皿用旧报纸包裹，放入干热灭菌箱内，在160～170 ℃下灭菌2h。 8．倒平板: 待培养基冷却到50 ℃左右时，在酒精灯附近倒平板。（倒平板操作见课本）2d后观察平板，无杂菌污染才可用来接种. 9．无菌检查： 将灭菌的未接种（或者接种无菌水）的培养基放入37℃的温室中培养24—48小时，以检查灭菌是否彻底。 （二）纯化大肠杆菌 接种方法有： 平板划线法和稀释涂布平板法 微生物的接种技术： 原理： 想方设法在培养基上得到由一个细菌 繁殖而来的肉眼可见的菌落，即获得较 纯的菌种。 涂布器 接种环 接种针 三.大肠杆菌的纯化培养： ㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 ㈡纯化大肠杆菌（目的） ⑴平板划线法： 菌种 划3个平板 1个不划线 1.接种： 接种环 防止划破培养基 （重复实验） （空白对照） 1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？ 答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到单个菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。 2.在灼烧接种