异株荨麻β—谷甾醇提取工艺优化.docVIP

异株荨麻β—谷甾醇提取工艺优化摘要：用正交试验和方差分析研究异株荨麻（Urtica dioica L.）β-谷甾醇的超声波辅助提取工艺，以β-谷甾醇得率为指标，优选出了最佳的提取工艺。结果表明，最佳的提取工艺为料液比1∶20（m/V，g∶mL）、提取时间30 min、提取温度60 ℃。用超声波辅助提取异株荨麻中的β-谷甾醇，操作简单、安全、快速、萃取率高。 关键词：异株荨麻（Urtica dioica L.）；β-谷甾醇；超声波；提取；正交试验 中图分类号：Q949.737.5；R284.2 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2012）20-4601-03 异株荨麻（Urtica dioica L.）为荨麻科（Urticaceae）荨麻属（Urtica Linn.）多年生草本植物，全草或根入药，广泛分布在欧洲、美洲、非洲和亚洲的温带地区，在中国云南、西藏、青海和新疆等地也有野生资源分布。作为草药主要用于治疗前列腺增生、风湿性关节炎、过敏性鼻炎、皮肤疾病、高血压、心脏病、糖尿病等病症；此外还具有抗病毒、增强免疫力、美容及食疗保健等作用。其活性成分主要有黄酮类、有机酸类、酚类、苯丙素类、甾醇、蛋白质、多糖等。对于异株荨麻的研究和开发利用国外较为成熟，特别是德国对其在医药方面的开发已取得了显著成效，获得了异株荨麻提取物和提取物复方制剂的多项专利[1]。而目前中国国内的研究还处于起步阶段，一般只在民间用于治疗风湿病、扭伤疼痛、皮肤瘙痒、肾结石、关节炎、消化道出血、痔疮出血、贫血症、牛奶分泌缺陷、头皮护理等病症[2，3]。 甾醇根据来源的不同分为植物甾醇、动物甾醇和菌类甾醇三大类。植物甾醇主要有谷甾醇、菜油甾醇和豆甾醇，主要存在于植物的油脂中[4]，植物甾醇是一种类似于环状醇结构的物质[5]，谷甾醇和豆甾醇的R基是乙基，而谷甾醇没有侧链上的双键。植物甾醇具有降低胆固醇[6，7]、抑制癌细胞生长[8]、防止前列腺肥大[9]及调节血脂[10]等功效，是当前世界甾体药物迫切需要的重要药源。植物甾醇和植物甾醇衍生物由于其特有的理化特性[11]而被广泛地应用于医药、食品、化妆品、饲料[12]等行业。 近年的研究表明，β-谷甾醇具有明显地降胆固醇、止咳、抗癌、抗炎、抗氧化、防治高血压等药理作用[13]。荨麻所具有的药理功能与其中所含有的β-谷甾醇有紧密的关系[2]。但由于提取条件没有优化，β-谷甾醇得率较低。为了保证异株荨麻β-谷甾醇的提取完全，采用超声波辅助提取法对异株荨麻中β-谷甾醇进行提取，利用正交试验，以β-谷甾醇得率为考察指标，筛选出最佳提取工艺，并在此基础上进行多元线性回归，对影响β-谷甾醇提取的各因素进行了探讨，为异株荨麻中β-谷甾醇提取工艺提供科学依据。 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 原料 样品采集于北京林业大学西山林场。 1.1.2 试剂 β-谷甾醇对照品购自中国食品药品检定研究所，样品提取所用三氯甲烷为分析纯，试验用水为去离子水。 1.1.3 仪器 Varian CP3800气相色谱仪购自美国Varian公司，KQ-500DB型数控超声波清洗器购自昆山市超声仪器有限公司，Anke TDL-5离心机购自上海安亭科学仪器有限公司，SENCOR-201型旋转蒸发仪购自上海申顺生物科技有限公司，FW135型中草药粉碎机购自天津市泰斯特仪器有限公司。 1.2 方法 1.2.1 样品的处理 取新鲜的异株荨麻茎叶部分，放入烘箱中，在105 ℃杀青15 min后自然晾干，经中草药粉碎机粉碎，过80目筛得黄绿色粉末，置于干燥器中作为样品保存。精确称取样品粉末1 g，置于100 mL具塞三角瓶中，加入20 mL氯仿溶液，密塞，摇匀，称重，在45 ℃下超声波辅助处理30 min，取出放置至室温，称重，补足失重，以3 000 r/min离心5 min，取上清液，在滤渣中重新加入20 mL氯仿溶液，重复上述步骤3次，合并3次的滤液，混匀后作为供试品溶液。 1.2.2 色谱条件 检测器：FID；色谱柱：CP-Sil8CD（30 m×0.32 mm×0.25 μm）；进样口温度280 ℃，检测器温度300 ℃；载气（N2）30 mL/min，载气（H2）30 mL/min，进样量：1 μL。 1.2.3 标准曲线的绘制及β-谷甾醇得率的测定 1）标准曲线的绘制。准确称取于105 ℃干燥至恒重的β-谷甾醇对照品5 mg，置于5 mL容量瓶中，加氯仿溶解、稀释、定容至刻度，摇匀，即得1 mg/mL的β-谷甾醇对照品溶液。精密吸取β-谷甾醇对照品溶液适量，用氯仿稀释成0.016、0.020、0.025、0.050、0.080、0.100 mg/mL一系列浓度，在上述色谱条件下分