不同调控序列作用GUS 基因在烟草中瞬时表达活性.pdfVIP

植物学通报Chinese Bulletin of Botany 2007, 24 (4): 452458, .实验简报. 不同调控序列作用下GUS 基因在烟草中瞬时表达活性 * 谢伟, 乐超银, 郭政宏, 戴志鹏, 刘敏, 姚伟 三峡大学生物技术研究中心, 宜昌 443002 摘要 以pBI12 1为出发质粒, 利用烟草泛素启动子Ubi.U4 、CaMV35S启动子以及Kozak序列构建4种GUS基因表达载体, 通过叶盘转化法转化烟草叶片, 检测瞬时表达活性, 研究不同调控序列对外源基因表达的调控作用。结果表明: CaMV35S启 动子附加Kozak序列后使GUS活性比独立使用CaMV35S提高了近2倍; 双CaMV35S启动子附加Kozak序列驱动GUS基因的 表达活性与单CaMV35S附加Kozak序列相当; 烟草泛素启动子附加Kozak序列的表达活性为CaMV35S启动子附加Kozak序 列的1.5倍; Ubi.U4-CaMV35S复合启动子附加Kozak序列驱动GUS基因表达水平最高, 其表达效率是双CaMV35S启动子附 加Kozak序列调控下GUS表达效率的3倍, 为CaMV35S独立作用时的10倍。 关键词 GUS分析, Kozak 序列, 转基因烟草, 瞬时表达, 序列泛素启动子 谢伟, 乐超银, 郭政宏, 戴志鹏, 刘敏, 姚伟 (2007). 不同调控序列作用下GUS 基因在烟草中瞬时表达活性. 植物学通报 24 , 452458 . 启动子是决定外源基因转录效率的关键因素, 选择 (Gensc hik et al., 1994 ) 、马铃薯泛素Ubi7 启动子 合适的启动子对于增强外源基因的表达量至关重要。 (Garbarino and Belknap, 1994)、番茄泛素Ubi1- 1 启 目前广泛应用的组成型启动子CaMV35S启动子, 它在 动子(Hoff man et al., 199 1)和大麦泛素Mub1 启动子 单子叶植物和双子叶植物中都有较高效率的表达。但 (Causing and Jensen, 1990) 。玉米泛素Ubi- 1启动子 Chen 等(1998)将水稻CHITINA SE基因转入小麦后发 已经广泛地应用于玉米、小麦和水稻等单子叶植物中 现, 使用CaMV35S作为启动子时, 转入的植株到第2代 (Chen and Rubenstein, 1991; Christensen et al., 1992; 时CHITINA SE 全部表现出基因沉默, 而使用玉米泛素 Chen et al., 2001; 侯文胜等, 2002; 范媛媛等, 2004)。 Ubi- 1 启动子时, 在第4 代时, 该基因的表达量仍然较 烟草泛素启动子也有应用于双子叶植物中的报道 大。泛素(ubiquitin, Ub)是一种由76个氨基酸构成的多 (Genschik et al., 1994 ; Kang et al., 2003) 。另外, 根 肽, 是泛素蛋白酶体途径的重要组成部分, 植物生长发育 据Kozak (1986)提出的真核生物偏好的转移起始密码子 的很多方面受泛素蛋白酶体介导的蛋白降解途径的调控 周边序列, 许多研究报道起始密码子的周边序列做相应 (宋素胜和谢道昕, 2006) 。利用泛素启动子在细胞体内 修改, 可提高外源基因的表达量。例如, 张琦等(2006) 持久而高水平的转录调节作用, 将其整合至附加型的载 将Kozak序列导入油菜中进行表达分析, 叶片中的脂肪 体中, 可获得高水平的表达系统。因而在转基因植物中, 酸分析结果表明目的脂肪酸-亚麻酸和十八碳四烯酸的 泛素启动子有很大的应用潜力。目前, 已经从很多泛素 含量均获得相应提高。 基因中分离得到启动子序列, 包括玉米基因组中的Ubi- 本研究用烟草泛素启动子Ubi.U4 、CaMV35S 启 1 启动子(Christensen and Quail, 1996) 、水稻泛素 动子以及Kozak 序列构建了4