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17β雌二醇对人桡动脉舒张作用体外实验 　 作者：苏海川，赵玉红 ，韦耿泽，陈军，李陕区 【摘要】 目的： 研究17β雌二醇（17βestradiol, E2）对人桡动脉(RA)的舒张作用及其机制. 方法： 采用离体血管灌流的方法，观察E2对人RA的舒张作用以及NO合成酶抑制剂左旋硝基精氨酸甲酯(NωnitroLarginine methyl ester, LNAME)，8BrcGMP和鸟苷酸环化酶抑制剂美蓝(MB)对这一过程的影响. 结果： 观察到E2(0.1~100 μmol/L)可剂量依赖性地舒张血管且具有内皮依赖性；8BrcGMP(0.1~1×103 μmol/L)也可引起剂量依赖性的血管舒张效应. 10 μmol/L MB使E2舒张人RA的作用完全消失. 10 μmol/L LNAME能部分抑制E2舒张TA的作用. 结论： E2对RA的急性舒张作用具有内皮依赖性. 此作用是E2通过非基因组方式使血管内皮细胞分泌NO、进而可能引起血管平滑肌细胞内的cGMP水平升高实现的. 【关键词】 雌二醇；桡动脉；一氧化氮； 环GMP 　0引言 　　绝经前妇女心血管疾病发病率明显低于同龄男性和绝经后妇女，说明雌激素具有很强的心血管保护作用［1］. 动物研究表明，雌激素能够通过非基因组途径快速舒张血管，雌激素的快速舒血管作用可能是雌激素促进了血管内皮细胞释放NO，进而抑制平滑肌细胞的收缩［2］. 有报道，雌激素可以直接抑制血管平滑肌细胞的收缩作用，产生舒血管作用［3］. 然而，雌激素作用于血管的确切机制还未完全清楚，雌激素对人动脉的作用及其机制也少见报道. 我们采用离体灌流人桡动脉环，观察雌激素对保留内皮和去内皮血管的急性舒张作用，并进一步研究这种舒张血管的作用机制. 　　1材料和方法 　　1.1材料人桡动脉由西京医院心血管外科取材自10例行冠状动脉旁路移植术的男性患者，年龄45～65 (55±8)岁. 17β雌二醇、左旋硝基精氨酸甲酯(NωnitroLarginine methyl ester, LNAME)、美蓝（MB）、8BrcGMP、去甲肾上腺素（NE）（美国Sigma公司）. RM6280多道智能生理记录及分析处理系统（第四军医大学生物医学工程系）. 　　1.2方法 　　1.2.1主要药物配制17β雌二醇用DMSO配制成10 mmol/L的原液，实验前用Krebs 液稀释成工作液. LNAME,MB用去离子水配成10 mol/L原液，实验时加入Krebs 液，工作浓度为10 μmol/L. 8BrcGMP直接用Krebs 液配成工作液（0.1~1000 μmol/L）. Krebs 液成分（mmol/L）：NaCl 118, KCl 4.75, CaCl2 2.54, KH2PO4 1.19, MgSO4 1.19, NaHCO3 25, 葡萄糖10，充以含950 mL/L O2和50mL/L CO2的混合气，用HCl调pH至7.2～7.4. 　　1.2.2离体血管环灌流将游离的RA放入到预冷、充以含950 mL/L O2和50 mL/L CO2 Krebs 液中，仔细去除血管上的脂肪及结缔组织，将动脉剪成2～3 mm的小段，然后将血管环套在不锈钢小钩上，放入37℃, 充以含950 mL/L O2和50 mL/L CO2的Krebs 液中， 并连接在张力传感器上. 给血管环加0.5 g的前负荷，在Krebs 液中平衡至少120 min以上，在此过程中，孵育血管环的液体每15 min换1次，并使前负荷维持在0.5 g. 加入10 μmol/L的NE检测标本活性（收缩幅度小于500 mg者弃去），然后冲洗使血管张力恢复到基线. 稳定30 min后重复给予NE，待血管收缩达到稳定值时逐步增加E2的浓度（0.1～100 μmol/L）. 去内皮采用细钢丝插入血管腔中滚动完成. 用10 μmol/L的乙酰胆碱（Ach）对血管环是否有舒张反应作为判断血管内皮是否完整的标准. 　　统计学处理： 血管环的例数n等于提供血管的患者数. 以NE对血管环收缩的最大效应为100%. 制作累积浓度舒张反应曲线，求出最大舒张反应值（Rmax）和血管最大舒张的半数有效浓度（EC50）. 统计学处理采用组间t检验， Plt;0.05为差异显著. 　　2结果 　　2.1E2对人桡动脉的作用人桡动脉血管环用1 μmol/L的NE产生张力，待稳定后加入E2 (0.1～100 μmol/L). 数据用1 μmol/L NE预收缩的血管舒张到未加药前的百分数表示. NE使保留内皮或去内皮的HIMA收缩后，E2可引起剂量依赖性的舒张效应，且具有内皮依赖性(图1). 　　图 1E2对人桡动脉舒张的量效关系（