5AzaCdR对人肾癌OSRC2细胞生长及γ连环蛋白表达影响.docVIP

5AzaCdR对人肾癌OSRC2细胞生长及γ连环蛋白表达影响 　 作者：陶美满， 孙浩， 田福起， 马克钧， 郭涛， 潘鹏， 徐强 【摘要】 目的： 研究甲基化抑制剂5氮杂2′脱氧胞苷（5AzaCdR）对人肾癌OSRC2细胞增殖、凋亡及γ连环蛋白（γcatenin）表达的影响。方法： 使用不同浓度（10-7，10-6，10-5,10-4 mol/L）的特异性DNA甲基转移酶抑制剂5AzaCdR处理OSRC2肾癌细胞株。MTT检测5AzaCdR对肾癌细胞株OSRC2的生长抑制作用。流式细胞仪检测5AzaCdR对OSRC2肾癌细胞株凋亡的影响。细胞免疫化学检测5AzaCdR处理OSRC2肾癌细胞株后γcatenin表达的变化。结果： 5AzaCdR明显抑制肾癌细胞的增殖，促进其凋亡，且与药物浓度及作用时间有关。药物处理后γ连环蛋白表达增加。结论： γcatenin蛋白表达受甲基化的抑制，提示5AzaCdR可使γcatenin基因去甲基化而抑制肾癌OSRC2细胞株增殖，并促进其凋亡。 【关键词】 5氮杂2′脱氧胞苷； 肾癌； γ连环蛋白； 细胞凋亡; 甲基化 ［Abstract］ Objective: To investigate the effect of methylation inhibitor 5Aza2deoxycytidine on the growth of human renal cancer cell line OSRC2 and γcatenin expression.Methods： Human renal carcinoma OSRC2 cells were treated with different concentrations of 5AzaCdR（10-7,10-6,10-5,10-4 mol/L） respectively.Then the growth rate of the cells was detected by MTT assay.The apoptosis was analyzed by flow cytometry.The immuneocytochemistry was used to detect γcatenin levels in the cell line before and after treatment with 5AzaCdR. Results： 5AzaCdR can inhibit the growth of OSRC2 cells，and the apoptotic rate was also increased after 5AzaCdR treatment.γcatenin expression levels in OSRC2 cells were increased after 5AzaCdR treatment. Conclusion： γcatenin expression levels were inhibited by methylation, 5AzaCdR can inhibit the growth,and promote the apoptosis of OSRC2 cells by inducing demethylation in the promoter region of γcatenin gene. ［Key words］ 5Aza2deoxycytidine; renal carcinoma; γcatenin; cell apoptosis;methylation 肾细胞癌的发病率居泌尿系统肿瘤的第二位，目前的治疗仍以根治性手术为主，但术后复发率达20%以上，且放、化疗效果不佳，因此迫切需要早期诊断方法和其他有效的治疗［1］。肾细胞癌的发生、发展与多种因素有关, 抑癌基因失活是关键因素之一。研究表明, 抑癌基因失活的主要方式有基因的缺失、突变和启动子区域的过甲基化等［2］。γ连环蛋白(γcatenin)是一种多功能蛋白质，近年研究显示γcatenin蛋白在多种肿瘤中表达减少, 国外有研究证实在肾癌组织及细胞其表达明显下调［3］,启动子区域CpG岛的过甲基化可能是其失活的主要方式,国内尚无相关的研究。我们采用5氮杂2′脱氧胞苷(5AzaCdR)对肾癌细胞株进行处理,检测γcatenin表达,进一步研究肾癌细胞中γcatenin表达下降是否与基因甲基化有关，探索上调或恢复肾癌细胞中γcatenin正常表达的可能