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ABCA1基因多态性及血浆载脂蛋白A1水平关系 　 作者：李亚，王玉明，王丹，贺勇 【摘要】 目的：探讨汉族人群腺苷三磷酸结合盒转运体A1（ABCA1）基因单核苷酸多态性（SNP）与血浆载脂蛋白A1（apoA1）水平的关系. 方法：选取ABCA1基因R219K, V825I, M883I和R1587K等4个编码区SNPs，采用PCR限制性片断长度多态性分析技术确定376名健康个体基因型；用THESIAS程序分析SNPs的连锁不平衡关系及单倍型. 结果：受检人群中，4种SNPs各自不同基因型个体间apoA1水平差异均未见统计学意义（P＞0.05）. R219K与M883I, V825I与M883I以及V825I与R1587K两两间存在连锁不平衡(Plt;0.01). 以V825I 和R1587K 构建的两位点单倍型中，IK单倍型携带者apoA1水平较VR单倍型携带者显著降低(Plt;0.05). 结论：ABCA1基因V825I和R1587K多态性与汉族人群血浆apoA1水平变化有关，但这种关联取决于该两个SNPs间形成的单倍型. 【关键词】 ABCA1基因；载脂蛋白A1；单倍体型；连锁不平衡 0引言 血浆高密度脂蛋白胆固醇（highdensity lipoprotein cholesterol，HDLC）水平降低是冠心病的独立危险因素之一［1］. 腺苷三磷酸结合盒转运体A1（ATPbinding cassette transporter A1，ABCA1）介导胆固醇、磷脂从肝外组织的流出，并通过与载脂蛋白A1（apolipoprotein A1，apoA1）相互作用，在胆固醇逆向转运和高密度脂蛋白（highdensity lipoprotein，HDL）生成的起始阶段发挥着关键的作用，因此，ABCA1被认为是决定HDLC水平的主要因素之一［2］. 群体遗传学研究表明，ABCA1基因的某些单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism，SNP）可改变ABCA1蛋白活性并由此引起HDLC水平变化，从而影响个体对冠心病的易感性［3-4］. 然而，有关ABCA1基因SNPs对血浆apoA1水平影响的研究报道却相对缺乏.为此我们在本研究中探讨了ABCA1基因4种SNPs及其构成的单倍型与汉族人群apoA1水平变化的关系. 1对象和方法 1.1对象来自四川大学华西医院和成都医学院第一附属医院无血缘关系的四川地区汉族体检个体376（男194，女182）例，年龄(58.4±8.6)岁，apoA1水平（1.324±0.186） g/L，体质量指数（24.62±3.39） kg/m2，总吸烟率为27%，并经询问病史、体检、心电图等检查排除心血管疾病史. 1.2方法 1.2.1标本采集与处理禁食12 h后抽取研究对象外周血5 mL，采用免疫比浊法并按试剂盒（上海荣盛生物技术公司）推荐条件测定血浆apoA1水平；另采集外周血3 mL，1 mL ACD抗凝，盐析法提取DNA，TE缓冲液溶解DNA并置于4 ℃冰箱中备用. 1.2.2多态位点的基因型分型采用PCR限制性片断长度多态性分析法对4个SNPs进行分型. 首先，参照基因组序列（GenBank登录号：NM005502）设计合成相应PCR引物，对受检者ABCA1基因R219K，V825I，M883I和R1587K等4个SNPs位点所包含的DNA序列进行扩增；再取扩增产物15 μL，分别加入4 U限制性内切酶和2 μL 酶切缓冲液，并加超纯水至总体积20 μL，37℃水浴中保温16 h；最后，消化产物经30 g/L琼脂糖凝胶电泳后，用凝胶成像系统分析电泳结果，判定个体基因型. PCR反应条件、限制性内切酶以及各基因型酶切情况见表1.表1ABCA1基因SNPs的基因型分型 统计学处理：每个SNP的HardyWeinberg平衡检验用χ2检验，在HWE软件上进行. 单个SNP位点基因型与apoA1水平的关系分析采用协方差分析（用SPSS10.0软件）. SNPs间配对连锁不平衡估算以及各种单倍型与apoA1水平的关联分析均使用THESIAS程序进行. apoA1水平用x±s表示；除连锁不平衡检验用α=0.001为检验水准外，其余统计学分析均以P≤0.05为差异有统计学意义. 2结果 2.1等位基因和基因型的频率分布经χ2检验，4种SNPs各基因型频率在本研究人群中分布符合HardyWeinberg平衡（P＞0.05），表明本研究样本具有群体代表性. 其中，变异型等位基因K219和I825的频率高于欧美人群（0.452 vs 0.27, 0.323 vs 0.056，P＜0.01）；而I883等位基因在欧美人群则为野生型等位基因［5］