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BRCA2及LIM结构域蛋白FHL2相互作用 　 ;作者：白玉杰，Seetha SV， Vamla B, 高庆生【关键词】; 乳腺肿瘤　　Interaction between BRCA2 and the LIM domain only protein FHL2 ; 　　【Abstract】 AIM:; To screen; genes encoding proteins which can interact with BRCA2; via yeast twohybrid system, confirm the interaction and analyze their functional linkage. METHODS:; 3′region of BRCA2 gene was used to construct the “bait” plasmid and to screen the cDNA library of; normal human mammary gland. Coimmunoprecipitation, mammalian twohybrid and Luciferase assay were used to analyze the association and putative function. RESULTS: Many genes encoding proteins interacting; with BRCA2, including the FHL2, were pulled out by yeast twohybrid screening. The in vivo binding and functional relation between BRCA2 and FHL2 was demonstrated; by coimmunoprecipitation, mammalian twohybrid assay and luciferase detection. CONCLUSION:; The interaction and the functional linkage between BRCA2 and FHL2 was confirmed; and which provides; fresh insights into the biological functions of BRCA2.　　【Keywords】; breast neoplasms; genes, suppressor, tumor; BRCA2; yeast twohybridization; FHL2; 　　【摘要】 目的： 应用酵母双杂交方法筛选BRCA2相互作用蛋白编码基因，验证其相互作用并研究其功能联系. 方法： 以BRCA2基因 3′端片段构建酵母双杂交质粒，筛选正常人乳腺上皮细胞cDNA文库，获得编码相互作用蛋白的基因，采用免疫共沉淀、哺乳细胞双杂交和荧光酶测定等方法进一步验证蛋白间相互作用和功能联系. 结果： 采用酵母双杂交系统筛选，获得了多个编码BRCA2相互作用蛋白的基因，其中包括已知的FHL2蛋白；免疫共沉淀和哺乳动物细胞双杂交试验显示BRCA2和FHL2在体内特异性结合，并证实FHL2在体内形成同源二聚体；转录活性分析发现BRCA2与FHL2有协同转录激活作用. 结论： 发现BRCA2与FHL2蛋白间相互作用和功能联系，为BRCA2功能研究提供了新的方向. 　　【关键词】; 乳腺肿瘤；基因，抑制，肿瘤；BRCA2；酵母双杂交；FHL2　　0引言　　乳腺癌是西方妇女最常见的恶性肿瘤，发病率约为10%［1］，死亡率高达30%［2］. 我国发病率低于西方国家，大约2%-3％，但近年来呈快速上升趋势，在上海、天津及沿海地区已成为女性发病率最高的恶性肿瘤［3］. 目前研究最多的遗传因子是乳腺癌抑制基因BRCA1［4］和BRCA2［5，6］. BRCA2基因突变携带者发生乳腺癌、卵巢癌及胰腺癌的危险性显著高于正常人群［7］，BRCA2参与双链DNA断裂损伤修复、维持染色体稳定、转录调控等细胞功能［ 8-10 ］. FHL2是1998年Chen等从胎儿心脏cDNA文库克隆的一个单纯LIM结构域蛋白，含4个半LIM结构域而得名（Four and half LIMonly protein2, FHL2）.　　我们采用酵母双杂交系统筛选正常人乳腺上皮细胞文库，发现FHL2是BRCA2相互作用蛋白之一，不仅哺乳细胞双杂交证实了体内结合，而且还发现二者有转录激活协同作用，为BRCA2和FHL2的功能研究提示了新的方向.　　1材料和方法　　1.1材料HA109酵母细胞；酵母双杂交系统－3全套质粒（pGBKT7, pGADT