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HPLC法测定阿莫西林颗粒剂含量及有关物质 　 作者：洪建文 李趣嫦 王彦蝶 【摘要】 目的 建立阿莫西林颗粒剂中阿莫西林的含量测定及有关物质检查的方法。方法 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液（pH值5.0）乙腈（体积比97.5∶2.5）为含量测定的流动相；以0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液（pH值5.0）乙腈（体积比99∶1）为流动相A， 0.05mol/L磷酸二氢钾溶液（pH5.0）乙腈（体积比80∶20）为流动相B，梯度洗脱检查有关物质，检测波长230 nm，柱温30 ℃，流速 1.0 mL/min。结果 阿莫西林分别在0.1～1 mg/mL(r=0.999 9，n=7)与0.049～0.0012 mg/mL(r=0.999 8，n=5)范围内与峰面积线性关系良好，低、中、高3个浓度的回收率分别为100.2%、99.8%和100.0%(RSD=0.2%，n=9)。阿莫西林有关物质检查的检测限为2 ng，且主成分与有关杂质均能有效分离。结论 本文建立的含量测定方法快速、准确、重现性好，有关物质检查方法专属、灵敏，可用于阿莫西林颗粒剂的质量控制。 【关键词】 阿莫西林颗粒剂 含量测定 有关物质 高效液相色谱法 阿莫西林颗粒剂是香港联邦制药厂有限公司产品，是广谱半合成青霉素类抗生素，具有疗效好、不易致过敏等优点，广泛应用于儿童呼吸系统、泌尿生殖系统、消化系统感染。阿莫西林颗粒剂现行质量标准为进口药品注册标准。该标准采用选择性较差，影响因素较多，试剂配制繁杂且有一定毒害，操作步骤也较繁琐的紫外分光光度法进行含量测定，未进行有关物质的检查。该制剂在《国家药品标准》化学药品地方标准第二册中有收载，也未进行有关物质检查。作为儿童药品，为了更好地控制本产品质量，提高进口注册标准，保证产品的疗效，本文采用高效液相色谱法［1-4］对阿莫西林颗粒剂中阿莫西林的含量及有关物质进行研究，建立了快速、准确、重现性好的含量测定方法及专属、灵敏的有关物质检查方法，可更好用于本品的质量控制。 　　1 仪器与试药 　　Agilent1100高效液相色谱仪，Agilent1200高效液相色谱仪，Sartorius BP211D万分之一电子天平。 　　阿莫西林对照品（中国药品生物制品检定所，批号为130409200609，纯度为86.6%，供含量测定用），阿莫西林颗粒剂（香港联邦制药厂有限公司，批号为17345、17374、17146、17155，规格：0.125 g/包），乙腈（色谱纯），磷酸二氢钾、氢氧化钾、氢氧化钠（分析纯），水为超纯水。 　　2 方法与结果　　 2.1 检测波长的选择 　　取样品适量，加流动相溶解并稀释，在波长200～300 nm之间进行紫外扫描，结果阿莫西林在230 nm波长处有最大吸收，同时杂质在230 nm也有较大响应。因此选择230 nm为本法的检测波长。 　　2.2 含量测定 　　2.2.1 色谱条件 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液（用2 mol/L的氢氧化钾调节pH值至5.0）乙腈（体积比97.5∶2. 5）为流动相，流速为1.0 mL·min-1，检测波长为230 nm，柱温30 ℃，进样量20 μL。色谱结果见图1。 　　A.对照品;B.样品 　　图1 阿莫西林颗粒剂含量测定的HPLC色谱图（略） 　　Figure 1 HPLC of amoxicillin 　　2.2.2 溶液的制备 对照品溶液：精密称取阿莫西林对照品适量，加流动相制成每1 mL含0.5 mg的溶液，即得。 　　供试品溶液：取装量差异项下的内容物，研细，精密称取粉末适量，加流动相溶解并定量稀释成每1 mL含0.5 mg的溶液，滤过，取续滤液，即得。 　　2.2.3 专属性试验 取空白辅料按“2.2.2”项方法制备溶液，进样测定。结果表明空白辅料对样品测定无干扰。将供试品在60 ℃温度下放置10 d，于第10天取样，按“2.2.2”项方法制备溶液，进样测定。结果表明本品经高温加速实验后，杂质总数和总量均有所增加，主成分与各种分解产物完全分离。将供试品在相对湿度92. 5%（KNO3饱和溶液），温度35 ℃下放置10 d，于第10天取样，按“2.2.2”项方法制备溶液，进样测定。结果表明本品经高湿加速实验后，杂质总数和总量均有所增加，主成分与各种分解产物完全分离。色谱图见图2。 　　A.空白辅料;B.高温降解;C.高湿降解;1.阿莫西林 　　图2 阿莫西林专属性试验HPLC色谱图（略） 　　Figure 2 HPLC of amoxicillin for selectivity test 　　2.2.4 线性关系考察 精密称取阿莫西林对照品适量，用流动相