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Tricine系统检测低分子量蛋白酶抑制剂电泳方法探究 　作者：廖海 周嘉裕 高冬梅 黄丹娥 靳晓娥 李利平 【摘要】 　　目的建立一种能够检测不同分子大小（尤其是低分子量）蛋白酶抑制剂的电泳方法。方法根据特异蛋白酶抑制剂抑制靶蛋白酶活性的原理，借助明胶-Tricine-SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离样品，胶板经蛋白酶水解后，以考马斯亮蓝染色。结果小分子量的胃蛋白酶抑制剂与较大分子量的BBI均能在该方法中显示出活性带，并且利用该方法检测到山合欢种子中含有一种胰蛋白酶抑制剂。结论该方法能够满足不同分子大小、不同类型蛋白酶抑制剂检测的需要。山合欢胰蛋白酶抑制剂的发现对山合欢进一步的研究和综合开发有重要意义。 【关键词】 山合欢 Tricine系统 蛋白酶抑制 电泳 　　Abstract：ObjectiveTo establish an detecting method for protease inhibitors, especially for low-molecular-weight inhibitors. MethodsInhibitor samples were separated on a gelatin-SDSin a Tris-Tricine buffer system. After electrophoresis, the gel was incubated with the target proteases to hydrolyze the background gelatin. The inhibitor bands, which were undigested by the target proteases, were stained.ResultsLow-molecular-weight inhibitor (pepstatin A) and larger inhibitor (soybean Bowman-Birk inhibitor) were demonstrated by this method and showed clear blue inhibitor bands in the white background. By this method, a trypsin inhibitor was detected from the seeds of Albizzia kalkora (Roxb.) Prain. ConclusionThis method not only fit for inhibitors with different molecular mass, but fits for inhibitors with various species. Moreover, the trypsin inhibitor found in Albizzia kalkora is important for further research and overall exploration. 　　Key words：Albizzia kalkora (Roxb.) Prain； Tricine buffer system； Protease inhibitor; Electrophoresis 　　蛋白酶抑制剂是一类可以抑制靶蛋白酶水解活性的功能多肽，参与体内许多重要生理过程的调节，广泛存在于豆科、禾本科及葫芦科等植物的种子及块茎中［1］。此外,动物的血液、精液、胰脏中以及酵母菌、链霉菌属等微生物中亦有蛋白酶抑制剂的存在［2］。蛋白酶抑制剂具有抗炎抗感染的能力，已被广泛用于治疗急性胰腺炎，烧伤后休克及产后大出血等疾病［3］。更重要的是许多临床前研究发现蛋白酶抑制剂具有降糖、抗辐射、抑制因不良环境因素引起的癌转化过程、抑制肿瘤细胞生长的作用，有可能开发出新型的治疗糖尿病、抗癌药物［4～6］。因此寻找及利用蛋白酶抑制剂是极具研究意义的。由于蛋白酶抑制剂属于小分子多肽，有些蛋白酶抑制剂的分子量甚至小于1 000，为了能从材料中寻找新的蛋白酶抑制剂，建立适合于低分子量蛋白酶抑制剂的检测方法十分必要。我们采用Tricine系统，在分离胶中加入明胶，电泳分离样品后，胶板以特定蛋白酶水解，最后用考马斯亮蓝染色的方法，建立了一种满足不同分子量大小、不同类型的蛋白酶抑制剂检测需要的电泳方法。 　　1 仪器与材料 　　TU-1901紫外分光光度计(北京普析)；Mini Protein III垂直板电泳槽（美国BioBrad公司）；山合欢Albizzia kalkora (Roxb.) Prain的成熟种子采自西南交通大学峨眉校区；Acrylamide、Bisacrylamide、胰蛋白酶、甘氨酸、Tris、T