两种Ames试验方法在蒲葵子提取物致突变试验中灵敏度探究.docVIP

两种Ames试验方法在蒲葵子提取物致突变试验中灵敏度探究 　【摘要】 目的通过Ames试验与彷徨试验对蒲葵子正丁醇提取物的致突变试验结果，比较两种试验的灵敏度。方法对蒲葵子用正丁醇浸提，用Ames试验方法（掺入法）与彷徨试验方法，对TA100鼠伤寒沙门氏菌株进行致突变试验。结果两种试验方法结果显示，蒲葵子正丁醇提取物在5～500 μg/ml剂量范围，以Ames试验方法与彷徨试验均检测出阳性结果，而在0.025 μg/ml 与0.5 μg/ml 剂量下，彷徨试验能检测出阳性结果，而Ames方法未检测出阳性结果。结论在较低浓度时，彷徨试验能检测出Ames试验检测不出的阳性结果，表明彷徨试验灵敏度较Ames试验高。 【关键词】 正丁醇提取物；Ames；彷徨试验；灵敏度 　　Abstract：ObjectiveTo compare the sensitivity of the Fluctuation test and Ames test for examination of the sudden change caused by Chinese fan-palm sub-normal butyl alcohol extraction.MethodsChinese fan-palm was extracted with the normal butyl alcohol, and Ames test and Fluctuation test were carried out to detect TA100 mouse salmonella typhimurium.ResultsThe results demonstrated that the extract in the range of 5～500 μg/ml，the Ames test method and the fluctuation test method detected the positive result, and in the range of 0.025～0.5 μg/ml, the Fluctuation test could examine positive result, but the Ames test could not change. ConclusionIn low concentration, the Fluctuation test can examine positive result but Ames test can not, which indicated that the Fluctuation test has higher sensitivity than the Ames test. 　　Key words：Normal butyl alcohol extraction; Ames; Fluctuation test; Sensitivity 　　鼠伤寒沙门氏菌／哺乳动物微粒体酶试验（Ames试验），是利用一组组氨酸营养缺陷型菌株加入待测物在有或没有微粒体活化系统条件下，发生回复突变的特征鉴定化学物质的诱变活性，现已成为初步筛选化学物潜在致突变的首选方法。彷徨试验也是一种细菌回复突变试验，根据营养缺陷型菌株与受试化学物温育后在缺乏相应营养物的培养液中的生长情况判断所试化学物的诱变活性，节省试验材料(辅酶Ⅰ其需Ames平板掺入法用量的20%)。实验结果表明，Ames试验结果与动物致突变性有90%的相符率，而彷徨试验对于弱的、具有细胞毒性和低浓度的诱变／致突变物的检测有其优超性。因此这些方法是较好的化学物质诱变活性评价的试验方法。 　　1 材料 　　1.1 受试药物 　　蒲葵子正丁醇提取物：蒲葵子分别用95%乙醇回流提取，浓缩成浸膏后，用正丁醇反复浸提，得到提取物的浓缩部分(以下简称蒲葵子提取物)。 　　1.2 实验菌株鼠伤寒沙门氏菌变异株组氨酸缺陷型TA100(由美国SIGMA公司提供)，经鉴定为合格菌株，置于平板备用。 　　1.3 阳性对照物① 2-氨基芴，美国SIGMA公司；②叠氮钠，美国SIGMA公司。 　　1.4 Ames试验培养液按文献方法［1］配制，彷徨试验培养液按美国SIGMA公司提供方法配制，体外活化系统(S9混合液)按标准方法经多氯联苯诱导大鼠肝微粒体酶制备而成［2］。 　　2 方法 　　2.1 Ames试验用标准平板掺入法［1］，在经灭菌的45℃左右含顶层琼脂2 ml的试管中，依次加入受试物、菌液各0.1 ml，S9混合液0.5 ml，充分混匀后倒在底层培养基平板上铺平，37℃培养48 h，每次试验同时设阴性，阳性对照，每个浓度设两个平行平皿，每个受试物至少重复1次，计数平均每毫升回空菌落数。 　　2.2