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中华补血草根提取物抗肿瘤活性实验探究 　【摘要】 目的研究中华补血草根提取物(Limonium sinense Ktze root extract, LSE)的抗肿瘤活性。方法MTT法测定体外培养的肿瘤细胞HepG2的存活率，检测LSE对离体细胞增殖的影响;建立小鼠移植性黑色素瘤模型，检测LSE对荷瘤小鼠的抑瘤作用并测定小鼠脾脏指数和胸腺指数。结果0.2～0.8 mg/ml LSE可剂量抑制肿瘤细胞HepG2的增殖;200，400，800 mg/kg LSE对荷瘤小鼠实体瘤具有显著抑制作用，抑制率分别为18.6 %、40.7 %及49.0 %。且各剂量组小鼠胸腺指数高于模型组小鼠。结论LSE具有显著抗肿瘤活性和一定免疫调节作用。 【关键词】 中华补血草; 抗肿瘤活性; 免疫调节 白丹花科补血草属植物中华补血草Limonium sinense (Girard) Kuntz，又名匙叶草、盐云草、海菠菜、海赤芍等，为多年生泌盐草本植物，喜生于盐渍化的低洼湿地上，广泛分布于我国东北、华北等地区，尤以江苏省沿海滩涂分布甚广[1，2]。植物蕴藏量大，资源丰富，在局部地区已开始人工栽培，人工栽培条件下植物生长迅速，产量高 [3]。中华补血草化学成分十分丰富，含有维生素、多糖、鞣质、多元酚、黄酮类、脂肪族化合物，以及氨基酸、矿物质等多种物质成分[4，5]，据记载：中华补血草，以根入药，功能祛湿，清热，止血，可用于治疗血淋、湿热便血、痔疮下血、血热、月经过多等症，民间流传使用中华补血草治疗功能性子宫出血症 [4]，对其药理作用的研究也一直集中在其抗菌止血方面。 　　有学者研究发现，中华补血草同属植物——二色补血草的水溶性多糖成分能有效抑制离体培养的肝癌细胞的生长 [6]，而有关中华补血草的抗肿瘤作用，尚无研究报道。本课题组通过建立小鼠移植性黑色素瘤模型，采用MTT试验的方法，探讨中华补血草全根提取物的抗肿瘤活性，取得了初步成果。 　　1 材料 　　1.1 中华补血草根提取物(LSE)的制备中华补血草采集于江苏省盐城滩涂，由江苏省滩涂生物资源与环境保护重点建设实验室于延球副教授鉴定。取中华补血草干燥全根100 g，粉碎，用蒸馏水提取1～3次，合并提取液，浓缩、干燥，得棕色干粉(LSE)32.9 g(得率32.9 %)。 　　1.2 实验动物ICR小鼠，标准体重，购自南京大学实验动物中心，许可证号：SCXK(苏)2002-0031;C57小鼠，标准体重，购自扬州大学比较医学中心，许可证号：SYXK(苏)2002-0045。 　　1.3 试剂MTT(四甲基噻唑蓝)，德国Sigma公司生产;FBS(胚胎牛血清)，美国Hyclone公司产品;DMEM培养基，美国Gibco公司产品;其他试剂均为国产分析纯。 　　2 方法 　　2.1 最大耐受量实验标准体重ICR小鼠20只，分为正常对照组及LSE组，每组10只。LSE用生理盐水配制成1 g/ml LSE液。LSE组小鼠以上述LSE液按0.25 ml/10g体重灌胃给药(相当于25 g提取物/kg体重)，正常对照组小鼠以同样体积生理盐水灌胃，给药后连续观察14 d，考察LSE的毒性。 　　2.2 离体培养肿瘤细胞模型的建立将对数生长期的肿瘤细胞HepG2用含10%胚胎牛血清的DMEM培养基制备成5×104个/ml的细胞悬液，按每孔100 μl接种于96孔板，37 ℃，5 % CO2温育24 h后，分组给药，给药终浓度为0.05，0.2，0.4，0.6，0.8 mg/ml的LSE。给药后继续培养。 　　2.3 MTT试验将“2.2”中给药后培养48 h的肿瘤细胞HepG2，弃去上清，加入无血清培养基100 ml,MTT(5.0 mg/ml)20 μl，37 ℃孵育4 h，弃去上清，每孔加入100 μl DMSO，振荡数分钟，在Bio-RAD 680全自动酶标仪上读取570 nm处吸光度值(OD570 nm)。以OD570 nm值表示细胞存活率，据此检测肿瘤细胞HepG2的存活率。 　　2.4 小鼠移植性黑色素瘤模型的建立取C57小鼠50只，于每只小鼠右侧腋窝皮下接种B16-F10黑色素瘤细胞悬液0.1 ml(5×105个细胞)。随机分成模型(Control)组，环磷酰胺(CTX，20 mg/kg，阳性对照)组，200，400，800 mg/kg LSE组，每组10只。分别用生理盐水、相应剂量CTX和LSE灌胃，1次/d，连续灌胃14 d。 　　2.5 抑瘤率测定将“2.4”项中的C57小鼠，于末次给药后24 h处死，剥取瘤块，用滤纸吸干后，测量瘤的体积，并计算抑瘤率。 　　抑瘤率(%)= ( 1-实验组瘤体积对照组瘤体积)×100% 　　2.6 脾脏指数和胸腺指数测定“2.4”项中的C57小鼠，于末次给药后2