中药山银花HPLC-UV-MS指纹图谱探究.docVIP

中药山银花HPLC/UV/MS指纹图谱探究 　摘　要：目的：探讨HPLC/UV/MS技术在中药山银花的指纹图谱研究中的效果。方法：采用Phenomenex Luna C18色谱柱(250mm×4.6mm, 5m)，采用0.1%的乙腈和甲酸水溶液对流动相以0.5ml/min的流速进行梯度洗脱；采用电喷雾离子阱质谱(ESI-ITMS)，对样品进行正负离子二级扫描，并对结果加以分析。结果：得到了重复性和分离度均非常好的山银花药材的HPLC/UV指纹图谱及HPLC/MS指纹图谱，分别对山银花药材的两种指纹图谱中的五个色谱峰进行了初步的定性分析。结论：HPLC/UV/MS技术在中药山银花的指纹图谱研究中的效果较佳，值得应用和推广。 关键词：山银花；HPLC；UV；MS 　　山银花(Flos Lonicerae Confusae)，别名山花、南银花、山金银花、土忍冬、土银花。忍冬科植物，红腺忍冬、毛柱忍冬、灰毡毛忍冬或华南忍冬干燥花蕾及带初开放的花朵。性味甘寒，具有清热解毒、凉散风热的功效。常用于痈肿疔疮，喉痹，丹毒，热毒血痢．风热感冒，温热发病的治疗[1]。为了探讨HPLC/UV/MS技术在中药山银花的指纹图谱研究中的效果，我们对从中药市场上购买而来的山银花药材采用Phenomenex Luna C18色谱柱加以分析，收到了较好效果，现报告如下。 论文代写 　　1 材料与方法 　1.1 仪器与试剂 　仪器：Waters 2695高效液相色谱仪（由美国沃特世科技公司提供，装备2996个二极管阵列检测器）；Finigan LCQTM离子阱质谱仪（由美国菲尼根质谱公司提供）；十万分之一精度分析天平（由常州诺基仪器有限公司提供）；禾创超声KH系列台式医用数控超声波清洗器（由昆山禾创超声仪器有限公司提供）。 　试剂：醋酸、乙腈（色谱纯，由美国飞世尔科技公司提供）；甲醇、石油醚（分析纯，由武汉化工厂提供）；二次去离子水（实验室制备）。 　1.2 样品制备 　所选山银花药材购于广州清平中药市场，经华南植物研究所叶华谷教授鉴定为山银花Caprifoliaceae Lonicera confusa DC.，产地为山东省临沂市；取适量的山银花药材，60℃干燥4h，粉碎，过40目筛。取2g药材粉末置于100ml锥形瓶中，加50％甲醇40mL，超声漂洗0.5h后过滤取滤液。所得滤液用0.45mm微孔滤膜再次滤过，已作为供试品溶液。 　1.3 色谱条件 　色谱柱：Phenomenex Luna C18色谱柱（250mm×4.6mm, 5m）。 　流动相：0.1%的乙腈和甲酸水溶液。 　洗脱梯度：0～42min（0％乙腈溶液～12％乙腈溶液），42～65min（12％乙腈溶液～19％乙腈溶液），65～100min（19％乙腈溶液～100％乙腈溶液）。 　流速：0.5ml/min；柱温：25℃ ；检测波长：254nm 　1.4 质谱条件 　采用电喷雾离子阱质谱(ESI-ITMS)，对样品进行正负离子二级扫描。通过设置时间程序，自动记录1h内的二级总离子流图，正负离子扫描图。干燥气体的流速设定为7L/min，温度设定为350℃。扫描质量范围设定为50～1000amu，毛细管电压设定为3.5kV，雾化气压设定为25psi。 　2 结果 　经过实验，我们得到了分离度和重复性均较好的山银花药材HPLC/UV及HPLC/MS指纹图谱，山银花药材的HPLC/UV指纹图谱见图1所示，HPLC/MS指纹图谱见图2及图3所示。 　图1：山银花药材的HPLC/UV指纹图谱 　　图2：山银花药材的HPLC/MS指纹图谱，ESI(+) 　图3：山银花药材的HPLC/MS指纹图谱，ESI(-) 　3 讨论 　由卫生部在2000年出版的《药典》中规定，金银花和山银花统称金银花，两品都可作金银花使用。但实际情况是，金银花的价格持续走高，长期在35元每公斤左右徘徊，而山银花的价格持续走低，长期在9元每公斤左右涨跌，这就使许多药厂为了降低成本，都使用山银花替代金银花。 　2005年，卫生部终于在新版的《药典》将两品分列两项，体现了新药典的合理性和科学性，因为金银花和山银花毕竟在在来源、性状、成分及含量等方面都有着很大的不同。在来源上，金银花为忍冬科植物忍冬的干燥花蕾或带初开的花。山银花为忍冬科植物灰毡毛忍冬、红腺忍冬或华南忍冬的干燥花蕾或带初开的花。在性状上，金银花呈棒状，上粗下细，略弯曲，表面黄白色或绿白色，密被短柔毛。而山银花呈棒状而销弯，表面绿棕色至黄白色。总花梗集结成簇。开放者花冠裂片，不及全长之半，质稍硬，手捏之稍有弹性，气清香，味微苦甘。在成分及含量上，金银花含绿原酸及木樨草苷，山银花含酸原酸，2005年版《药典》规定，金银花含绿原酸不得少于1.5