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中性粒细胞碱性磷酸酶染色实验条件探析 　【摘要】 目的 探讨中性粒细胞碱性磷酸酶染色的实验条件。方法 用40%、60%、80%的丙酮-枸缘酸固定液对中性粒细胞碱性磷酸酶染色固定条件进行测定。同时用2-氨基-2-甲基-1.3-丙二醇(pH9.4-9.6)缓冲液、巴比妥(pH9.2)缓冲液、Tris(pH9.2)缓冲液配制的基质液分别在10、15、20分钟的染色条件进行测定。结果 是选择60%的丙酮-枸缘酸固定30秒染色结果最好。三种不同的缓冲液和三个不同的孵育时间的染色结果经多因素方差分析，Plt;0.05，结果有统计学意义。结论 最佳染色条件为60%的丙酮-枸缘酸固定30秒,用Tris(pH9.2)缓冲液配制的基质液，孵育时间为15分钟。本方法帮助鉴别慢性粒细胞性白血病和类白血病有较大的实用价值。 【关键词】 中性粒细胞;碱性磷酸酶;白血病;类白血病 　　ABSTRACT Objective To discuss the experimental conditions of neutrophil alkaline phosphatase staining. Methods The immobilizing conditions of neutrophil alkaline phosphatase staining were detected by the stationary liquid of 40%, 60% and 80% acetone-citric acid, and at the same time, the staining conditions were detected at 10, 15 and 20 minutes in the matrix liquid prepared respectively with 2-amino-2-methyl-1.3-propylene glycol (PH9.4-9.6) buffer, barbital (PH9.2) buffer and Tris (PH9.2) buffer. Results Fixing in 60% acetone-citric acid for 30 seconds gave out the best staining results; the staining results of the three different buffers and the three different incubating times received the multiple factor variance analysis, the differences among them was of statistical significance (Plt;0.05). Conclusions The best staining conditions include fixing in 60% acetone-citric acid for 30 seconds, the matrix liquid prepared with Tris (PH9.2) buffer and incubation for 15 minutes; this method is of practical value in helping identify chronic myeloid leukemia and leukemoid reaction. 　　KEYWORDS neutrophil alkaline phosphatase leukemia leukemoid reaction 　　中性粒细胞碱性磷酸酶主要存在于中性成熟粒细胞，在pH9.6左右的碱性环境中，能水解基质液中的磷酸奈酚钠底物，释放出奈酚，后者与重氮盐偶联，生成不溶性的有色沉淀，定位于细胞质酶活性所在之处。由于不同的疾病，以及疾病的不同阶段均可引起碱性磷酸酶成分及含量的变化，故临床上常常用于白血病的分类，辅助血液系统等疾病的诊断与鉴别诊断、观察疾病疗效与预后以及对发病机制的探讨[1-2]。多年来，由于各实验室所用的固定液浓度和固定时间不统一，所用缓冲液及孵育时间不同，因此参考值变化较大，各实验室之间结果差异较大[3]。本文意在寻找一个最佳的实验条件，减少实验误差，更好为临床提供有用的数据。 　　1 材料与方法 　　1.1 取材 取20例正常人指间血涂片。白细胞分类计数结果,中性粒细胞50%～70%，淋巴细胞20%～30%，单核细胞2%～4%。细胞形态规则，结构完整。 　　1.2 试剂 (1)丙酮-枸缘酸固定液(pH4.2～4.5)： 枸缘酸缓冲液和纯丙酮分别按