反相高效液相色谱法测定三越麻黄颗粒中甘草酸含量.docVIP

反相高效液相色谱法测定三越麻黄颗粒中甘草酸含量 　 作者：滕亮，李桂荣，孙殿甲，木巴拉克 【摘要】 　　目的建立三越麻黄颗粒中甘草酸的反相高效液相色谱(RPHPLC)含量测定方法。方法采用反相高效液相色谱法测定三越麻黄颗粒中甘草酸含量，Kromasil ODS1 C18色谱柱（5 μm，4.6 mm×250 mm），流动相为乙腈0.05M磷酸二氢钾（用三乙胺调pH5.75）（26.5∶73.5），检测波长为250，柱温为40 ℃，流速为1.0 ml/min。结果三越麻黄颗粒颗粒中甘草酸的线性范围为3.75～154.5 μg/ml (r＝0.999 8)，加样回收率100.2%，RSD=2.5%。结论采用RP-HPLC法测定甘草酸具有简便、准确、重复性好的优点，可为三越麻黄颗粒的质量控制提供一定的依据。 【关键词】 高效液相色谱法 甘草酸 三越麻黄颗粒 　　三越麻黄颗粒由10味药材(麻黄、石膏、苦杏仁、板蓝根、甘草、陈皮、柴胡、射干、鱼腥草、浙贝母)精制而成。方中甘草为使药。甘草酸是甘草药材中的主要指标成分之一，拟定该成分的含量测定标准可以反映和控制本品的内在质量。本文参照有关文献［1～4］，建立了HPLC 法测定本品中甘草酸的含量，以期达到能够准确定量的目的。 　　1 仪器与试药 　　1.1 仪器Waters2690高效液相色谱仪，Waters2487紫外检测器，Kromasil ODS1 C18色谱柱（5 μm,4.6 mm×250 mm）及保护柱，电子分析天平（BS110S，北京赛多利斯有限公司）。 　　1.2 试药乙腈为色谱纯（一级），水为重蒸水，其它试剂均为分析纯 　　1.3 对照品甘草酸单铵盐（Aldrich Chem Co.，批号23,2246），使用前置于干燥器中干燥至恒重。 　　2 方法 　　2.1 色谱条件 流动相为乙腈0.05M磷酸二氢钾（用三乙胺调pH 5.75）（26.5∶73.5）；检测波长250 nm ； 柱温40 ℃ ； 流速1.0 ml/min。 　　2.2 溶液的配制 　　2.2.1 对照品溶液的制备取甘草酸单 铵盐对照品约20 mg，精密称定，置100 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取适量，用甲醇稀释成每毫升含3.75，7.49，11.59，14.68，18.62，22.40，26.27，30.13，38.63，74.93，154.40 μg甘草酸单铵盐对照品溶液。 　　2.2.2 供试品溶液的制备取本品适量，研细，精密称取约1.000 0 g，至50 ml量瓶中，加甲醇约30 ml，超声30 min，放冷至室温，定容至刻度，吸取约2 ml过0.45 μm滤膜，即得供试品溶液。 　　3 结果 　　3.1 系统适用性实验取“2.2.1”项下标准品溶液、“2.2.2”项下供试品溶液，照“2.1”项下的色谱条件分别注入高效液相色谱仪，记录色谱图。结果见图1。在上述条件下，橙皮苷和供试品中其它组分色谱峰可达基线分离，甘草酸与其相邻色谱峰的分离度大于1.5， 以甘草酸峰计算柱效， 其理论板数（N）为6 000 以上，拖尾因子T为1.04，同时取阴性对照溶液进样。结果表明，阴性对照在甘草酸色谱峰位置处无相应峰出现。故在系统适用性试验中规定理论板数不得低于6 000。供试品和阴性对照的 HPLC 色谱见图2～3。 　　　3.2 线性范围的考察精密量取甘草酸单铵盐对照品系列溶液10 μl进样，记录色谱图，测定其峰面积。结果见表1。并以峰面积值（A）对浓度（C）进行回归，得标准曲线方程：A＝5 834.7C-8 388.1,r＝0.999 8。以上结果表明，在3.75～154.5 μg/ml范围内，甘草酸峰面积值（A）与浓度（C）有良好的线性关系。 　　图1 甘草酸对照品色谱（略） 　　图2 阴性对照色谱图（略） 　　图3 供试品色谱（略） 　　表1 线性范围的考察（略） 　　3.3 精密度实验 精密吸取上述对照品溶液，重复进样5次，甘草酸峰面积值的RSD为0.28％。结果见表2。 　　表2 精密度实验结果（略） 　　3.4 稳定性实验取供试品试液（批分别于0，2，4，6，8，10 h，进样测定。结果见表3。实验结果表明，供试品液在10 h内稳定性良好。 　　表3 稳定性实验结果（略） 　　3.5 重复性实验 按拟定的含量测定方法，对同一批供试品，分别制备6份供试品溶液，测得峰面积并计算甘草酸含量。结果见表4。 　　3.6 回收率实验取已知含量的供试品9份（批，分别加入0.772 5 mg/ml的甘草酸对照品溶液0.46，0.58，0.7 ml，按上述供试品制备方法和色谱条件，制备加样回收供试品溶液并注入液相色谱仪，