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反相高效液相色谱法测定滇桂艾纳香中绿原酸含量
反相高效液相色谱法测定滇桂艾纳香中绿原酸含量
作者：雷婷 林翠梧 陈海燕 黎贵卿
【摘要】 目的用反相高效液相色谱法建立滇桂艾纳香中绿原酸的含量测定方法。方法Kromasil C18(4.6 mm×150 mm,5 μm)色谱柱，流动相为0.2%磷酸乙腈（93∶7），检测波长326 nm，流速1.0 ml/min。结果在该色谱条件下，绿原酸在15.3～61.2 mg/L范围内与其峰面积呈良好的线性关系，相关系数为0.999 2。样品平均回收率为100.5％，RSD为1.2%（n=6）。结论方法简便易行，结果准确，重复性好，可用于滇桂艾纳香中绿原酸含量的测定。
【关键词】 滇桂艾纳香 绿原酸 高效液相色谱法
Abstract：ObjectiveTo establish a method for determination of chlorogenic acid in Blumea riparia (Bl.) DC. by HPLC.MethodsColumn was Kromasil C18(4.6 mm×150 mm,5 μm).The mobile phase was 0.2%phosphoric acid-acetonitrile(93∶7). The detection wavelength was 326nm and flow rate was 1.0 ml/min.ResultsIn this condition, chlorogenic acid showed a good linearity in the range of 15.3～61.2 mg/L, r＝0.9992. The average recovery was 100.5%, and RSD was 1.2%(n=6).ConclusionThis method is reliable, simple and accurate. It can be use for the determination of chlorogenic acid in Blumea riparia (Bl.) DC.
Key words：Blumea riparia (Bl.) DC； Chlorogenic acid； HPLC
滇桂艾纳香Blumea riparia (Bl.)DC为菊科艾纳香属多年生木质草本植物，在我国仅分布在贵州、云南、广东、广西等省少数湿热地区［1］。以滇桂艾纳香为原料生产的妇血康颗粒具有止血、活血、祛淤、生肌及促进子宫复旧的功效。多年的临床研究表明，该产品独特的功效成分能迅速到达病灶，加速子宫内膜脱落、血管闭合，使卵巢功能迅速恢复正常，取效迅速。它填补了当今对“功血”病和上环后出血治疗尚无特效药的空白［2］。但目前对于滇桂艾纳香化学成分的研究很少，其中药材和相关制剂缺乏内在的质量评估标准。笔者在前期对滇桂艾纳香的化学成分分离及活性研究的基础上，确定绿原酸为滇桂艾纳香的主要药效成分之一［3~5］。本实验建立了滇桂艾纳香中绿原酸的反相高效液相色谱测定方法。
1 仪器与试剂
高效液相色谱仪：LabAlliance公司，prep 100 泵，Lab Alliance medol 500检测器，N2010双通道色谱工作站；SK3310LHC超声清洗器（上海科导超声仪器有限公司）；AL204型电子分析天平（梅特勒－托利多仪器有限公司）；绿原酸对照品为成都福润德实业有限公司提供，含量在99％以上；滇桂艾纳香干草（广西桂西制药有限公司提供）。乙腈、甲醇为色谱纯试剂，乙醇、磷酸为分析纯试剂，重蒸水自制。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 Kromasil C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5 μm)；流动相为0.2％磷酸－乙腈（93∶7）；流速1.0 ml ·min-1；检测波长326 nm［6］；柱温为室温；进样量10 μl。
2.2 对照品溶液制备精密称取绿原酸对照品25.5 mg,用甲醇溶解并定容至50 ml，摇匀。分别移取0.3，0.5，0.7，0.9，1.2 ml于5只10 ml容量瓶中加甲醇至刻度，摇匀。得到浓度分别为15.3，25.5，35.7，45.9，61.2 mg/L的溶液。
2.3 供试品溶液的制备 将滇桂艾纳香干草干燥后粉碎，过20目筛，混合均匀后精密称取1.5 g置于具塞烧瓶中，准确加入53%乙醇50 ml，称定重量，用超声波80℃提取1 h，放冷，再称定重量，用53％乙醇补足减失重量，摇匀备用。
2.4 线性关系考察 精密吸取对照品溶液10.0 μl，注入高效液相色谱仪，依法测定，见图1。以峰面积分值为纵坐标（Y），样品浓度（mg/ml）为横坐标（X），绘制标准曲线
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