小鼠肾发育中Calbindin-D28k定量分析.docVIP

小鼠肾发育中Calbindin-D28k定量分析 　【摘要】 目的 观察Calbindin-D28k在小鼠肾发生发育中的表达规律。方法 应用蛋白印迹技术对各组小鼠肾Calbindin-D28k的表达进行定量检测。结果 胚龄12 d Calbindin-D28k表达量极低；胚龄14 d到胚龄16 d表达量增加；胚龄16 d到胚龄18 d表达量无显著性变化；胚龄18 d到生后7 d表达量明显增加；生后7 d到生后14 d，Calbindin-D28k表达量减少。生后14 d到生后40 d，Calbindin-D28k表达量无显著性差异。结论 从胚龄12 d到生后7 d期间Calbindin-D28k表达的逐渐增强与小鼠肾钙离子转运能力的完善可能有一定的关系。 【关键词】 Calbindin-D28k 小鼠 肾发育 　　Abstract：Objective To observe the expression rules of Calbindin-D28k during renal development of mouse. Methods Western blotting technique was used to measure the protein content of Calbindin-D28k at different development stages of embryonic and postnatal mice. Results At E12, Calbindin-D28k expression could be hardly detected in the kidney. From E14 to E16, the expression was increased. There was no significant difference from E16 to E18. From E18 to N7, the expression of Calbindin-D28k was increased obviously. From N7 to N14, the expression of Calbindin-D28k was decreased. There was no significant difference between N14 and 40. Conclusions The expression of Calbindin-D28k is weak at E12, and is enhanced with ages to the peak at N7, and decreased thereafter. Calbindin-D28k is a calcium ferry protein in cytoplasm and is very important to renal calcium reabsorption during the development of kidney. Key words：Calbindin-D28k; mouse; renal development Calbindin-D28k最初是由Wasserman和Taylor［1］于1966年在鸡小肠粘膜中发现的，其分子量约为27.8×103，由于在小肠中的合成受1,25-二羟基维生素D3水平的调节,故又被称为维生素D依赖性钙结合蛋白（Vitamin D-dependent calcium binding protein，CaBP）［2］。Calbindin-D28k与肾发育关系的研究国外曾见报道［3，4］，但关于小鼠肾发育中Calbindin-D28k表达的定量研究国内尚未见报道。本实验通过蛋白印迹（Western blotting）技术定量检测小鼠肾发育过程中Calbindin-D28k的表达规律，探讨其与小鼠肾发育之间的关系。 1 材料和方法 　　1.1 实验动物 25～30 g 成年健康昆明小白鼠，由辽宁医学院实验动物中心提供［医动字第 SCXY(辽)2003-2007号］。 　　1.2 实验试剂 Calbindin-D28k单克隆抗体由武汉博士德生物工程有限公司提供;PVDF膜、SDS、NBT/BCIP、Tween-20、NP-40、PMSF等由SIGMA公司提供。 　　1.3 标本制备 选用成年健康昆明小白鼠，按雌雄比例1∶1同窝饲养，以阴道栓脱落的最早时间计为胚龄（E）0 d［5］。孕鼠分笼饲养，每日早8∶00、晚5∶00观察生产情况，以仔鼠出生的最早时间计为生后（N）0 d。分别取E10、12、14、16、18 d胎鼠和N1、3、7、