当归六黄汤中药配方颗粒及传统汤剂中盐酸小檗碱含量比较.docVIP

当归六黄汤中药配方颗粒及传统汤剂中盐酸小檗碱含量比较 　 作者：张丽艳 钟正灵 梁光义 靳凤云 曹佩雪 杨玉琴 李健 【摘要】 目的对当归六黄汤中药配方颗粒与传统汤剂中盐酸小檗碱的含量进行比较，从而为其临床应用提供依据。方法采用反相液相色谱法，DIKMA ODS-C18柱(5 μm，4.6 mm×250 mm)，流动相为乙腈－0.5%的三乙胺（磷酸调pH=3.00)（27∶73），流速为1.0 ml·min-1，柱温30℃，检测波长为343 nm。结果配方颗粒与传统汤剂中盐酸小檗碱含量分别为360.83 mg/处方，255.15 mg/处方。结论中药配方颗粒中盐酸小檗碱含量明显高于传统汤剂。 【关键词】 当归六黄汤 盐酸小檗碱 当归六黄汤出自李东垣《兰室秘藏》，药方组成为当归6 g，生地黄6 g，熟地黄6 g，黄连6 g，黄芩6 g，黄柏6 g，黄芪12 g，药材均为粗末。每服五钱（15 g），水两盏（300 ml），煎至一盏（150 ml），口服［1］。主治阴虚火旺证的发热盗汗，面赤心烦，口干唇燥，大便干结，小便黄赤，舌红苔黄，脉数等症。李东垣称当归六黄汤为“治汗之圣药也”，并为历代医家所推崇。本研究对当归六黄汤中药配方颗粒与传统汤剂中盐酸小檗碱的含量进行比较，从有效成分含量变化的角度探讨其临床应用的科学依据。 1 仪器与试药 Aglient 1100高效液相色谱仪；(包括真空脱气机，自动进样器，四元泵，DAD 检测器)， HP1100/ WIND3D化学工作站。盐酸小檗碱对照品（批号：110773-200611，供含量测定用）购自中国药品生物制品检定所。乙腈为色谱纯，水为纯净水，其它试剂均为分析纯。药材经贵阳中医学院董丽莎教授鉴定，当归为伞形科植物当归Angelica sinensia(Oliv.)Diels的干燥根，黄芩为唇形科植物黄芩Scutellaria baicalensis Georgi的干燥根，黄连为毛茛科植物黄连Coptis chinensis Franch.的干燥根茎，黄柏为芸香科植物黄皮树的干燥树皮Phellodendron chinense Schneid.。黄芪为豆科植物蒙古黄芪Astragalus membranaceus (Fisch.) Bge.var. mongholicus (Bge.)Hsiao的干燥根。地黄为玄参科植物地黄Rehmannia glutinosa Libosch.的干燥块茎。 2 方法与结果 2.1 中药配方颗粒、传统汤剂、阴性样品的制备 2.1.1 中药配方颗粒（分煎）样品称取黄芪120 g，先加8倍量的水，煎煮1 h后过滤，滤渣加6倍量的水煎煮1 h，过滤，合并滤液，浓缩，减压干燥，粉碎。分别称取生地、熟地、黄连、黄柏、当归、黄芩各60 g，按上述方法进行制备，即得各味药材的浸膏粉（该提取工艺为商品化当归六黄汤中药配方颗粒生产工艺，由贵州宏宇药业提供）。 2.1.2 传统汤剂（合煎）样品按处方比例称取各味药材粗粉，加20倍量的水， 煎煮至10倍量，过滤，浓缩，减压干燥，粉碎，即得传统汤剂样品（传统方法）。 2.1.3 阴性样品按照处方比例称取除黄柏、黄连外的各味药材浸膏粉，混合均匀，即得分煎阴性样品；按照处方比例称取除黄柏、黄连外的各味药材，加20倍量的水，煎煮至10倍量，浓缩，减压干燥，即得合煎阴性样品。 2.2 色谱条件色谱柱：DIKMA ODS-C18(5 μm,4.6 mm×250 mm)，以乙腈－0.5%的三乙胺（磷酸调pH =3.00)（27:73）为流动相，流速：1.0 ml/min，检测波长：343 nm，柱温：30℃。 2.3 对照品溶液的制备精密称取在60℃减压干燥4 h的盐酸小檗碱对照品适量，加甲醇制成浓度为0.156 2 mg/ml的溶液，作为对照品溶液，备用。 2.4 供试品溶液的制备分别精密称取干燥的分煎与合煎样品约0.4 g，置100 ml量瓶中，加盐酸∶甲醇(1∶100)稀释至刻度，称重，超声处理30 min，放冷，加盐酸∶甲醇(1∶100)补足减失溶媒，过滤，即得。 对照品、样品色谱图如图1。 a-盐酸小檗碱对照品 b-分煎样品 c-合煎样品 图1 对照品及样品色谱图 2.5 线性关系考察分别精密吸取对照品溶液1，2，4，6，8，10 ml置10 ml量瓶中，用甲醇定容至刻度,摇匀。在上述色谱条件下进样10 μl，测定峰面积。以峰面积积分值(A)为纵坐标，进样量(X)为横坐标，绘制标准曲线，计算得回归方程为A=1 781.4X-3.471 8，r=0.999 97盐酸小檗碱在0.156 2～1.562 0 μg范围内线性关系良好。 2.6 精密度实验精密吸取盐酸小檗碱对照品溶液10μl，连续进样6次，在上