当归对宫内缺氧后新生大鼠肾脏内血管内皮生长因子表达影响.doc

当归对宫内缺氧后新生大鼠肾脏内血管内皮生长因子表达影响 　【摘要】 目的研究当归对宫内缺氧后新生大鼠肾脏内血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。方法将孕期14 d的SD大鼠随机分为对照组、缺氧组和当归治疗组。缺氧组孕鼠自孕第14 天开始每天一次经尾静脉注射生理盐水8 ml/kg（连续7d），后用低张性缺氧模型致胚鼠宫内缺氧2 h（连续3 d：孕期第14，15，16天）；当归治疗组用250 g/L的当归注射液代替生理盐水，其余处理同缺氧组；对照组不缺氧，其余同缺氧组。3组孕鼠分娩当日取肾组织、多聚甲醛固定，石蜡包埋切片、VEGF免疫组化、400倍拍照、IPP6.0软件图像分析。结果缺氧组新生鼠VEGF 阳性细胞的数量和积分光密度值均较对照组增大 (P＜0.05)，当归组VEGF 阳性细胞数量和积分光密度值均较缺氧组减小(P＜0.05)。结论一定时间、一定氧浓度的宫内缺氧可刺激新生大鼠肾脏VEGF的表达增加 ；而当归注射液可使VEGF的表达下降。 【关键词】 当归； 缺氧； 肾； 血管内皮细胞生长因子 血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor ,VEGF) 是调节血管发生的基本生长因子,在肾脏中含量丰富，已有较多证据表明VEGF 在肾脏胚胎发育中起重要作用。宫内缺氧是影响胚胎发育的常见因素，而肾脏是对缺血缺氧最敏感的器官之一，VEGF是调节血管发生的基本生长因子，它可以与内皮细胞上的受体相结合，从而促进内皮细胞的增殖，加速新生血管的生成。许多组织器官在低氧环境下，都可诱导血管内皮细胞生长因子VEGF的表达，使毛细血管代偿增生，缓解缺氧状态。近年来也有报道VEGF与肾脏的生理和一些病理状态相关。本实验试图通过建立宫内缺氧模型，观察在体状态下缺氧对新生大鼠肾脏VEGF表达的影响，探讨VEGF与肾脏缺氧的关系，并观察中药当归对肾脏缺氧状态的调节作用。 　　1 材料 鼠抗VEGF（中杉金桥生物技术有限公司）、SABC试剂盒、DAB显色试剂盒(棕黄色) 购自武汉博士德生物工程公司；250g/L的当归注射液购自武汉大学附属第二医院药剂科（批号060926）。OLYMPUS Bx-70荧光显微镜成像系统为日本OLYMPUS光学仪器有限公司生产；德国莱卡切片机；三气培养箱（购自美国REVCO公司）。SD大鼠15只（220～250g）由泸州医学院 动物实验中心提供 。 　　2 方法 　　2.1 动物配种与分组 　　成年健康SD雌大鼠15只(体质量220～260 g)，分别与SD雄鼠合笼配种，次日晨见阴栓记为大鼠怀孕0 d，孕鼠随机分为对照组、缺氧组、当归组各5只。 　　2.2 宫内缺氧模型建立 　　参照余鸿［1］等制作的宫内缺氧模型。当归组孕鼠自孕14 d开始，每天下午2：00经尾静脉注射250g/L的当归注射液8ml/kg（孕第14～20 天，连续7 d），1h后放入设置好的三气培养箱(氧体积分数130 ml／L，温度25℃ ，二氧化碳体积分数0.4～0.6 ml／L)内缺氧2 h，连续缺氧3d(孕第14～16天)，第17，18，19，20天仍给予当归注射，但不缺氧。缺氧组用生理盐水代替当归注射液，其余同当归组。对照组不缺氧，余同缺氧组。 　　2.3 取材、石蜡切片及VEGF免疫组织化学测定 　　每组随机选取15个新生鼠肾脏，然后进行常规石蜡包埋，经肾脏冠状切面切片（片厚4 μm），每组切片脱蜡至水，各组随机取12张切片分别作VEGF(1∶200）免疫组化染色(常规链酶亲和素一生物素一过氧化物酶复合物法)。其余切片做HE染色，免疫组化切片在400倍显微镜下观察肾脏皮质，每张切片随机选取5 个视野,每个视野随机选取3～5 个近曲小管。采用OLYMPUS Bx-70荧光显微镜成像系统拍照，经Image-Pro Plus5.1图像分析系统对阳性细胞进行图像分析。 　　2.4 统计学处理各组间比较 　　用方差分析，两两比较用LSD法检验。采用SPSS13.0软件包完成数据分析（Plt;0.05）。 　　3 结果 　　3.1 对照组VEGF免疫组化反应阳性细胞分布呈区域性，大多位于肾远曲小管上皮细胞，胞质中有棕黄色颗粒 （图1a及表1）。 　　3.2 缺氧组VEGF免疫组化反应阳性细胞分布区域与对照组相似，与对照组相比缺氧组阳性细胞染色增强、阳性细胞数量增加、积分光密度值增大（P＜0.05）（见图1b及表1）。 　　3.3 当归治疗组VEGF免疫组化反应阳性细胞分布与对照组相似，与缺氧组相比缺氧组阳性细胞染色减弱、数量减少、其积分光密度值减小（P＜0.05）（见图1c，表1）。表1 3组新生鼠肾脏皮质区VEGF免疫组化结果（略） 　　　4 讨论 新生儿窒息是新生儿死亡和伤残的主要病因之一，本病致死致残