恶性肿瘤组织CD8+-CD28+ 细胞表达及细胞凋亡相关性.doc

恶性肿瘤组织CD8+/CD28+ 细胞表达及细胞凋亡相关性 　 作者：夏欣一，吴永明，潘连军，黄宇烽，周振英 【摘要】 　　目的 探讨恶性肿瘤组织中CD8+/CD28+细胞杀伤肿瘤细胞的机制。方法 用流式细胞术检测恶性肿瘤组织中CD8+/CD28+细胞表达率及细胞凋亡（APO）水平，并分析两者之间的关系。结果 恶性肿瘤组织的CD8+/CD28+细胞检出率为（6.86±4.19）%,显著低于正常对照组织（11.85±3.80）%（Plt;0.01）。恶性肿瘤组织APO检出率为（1.49±1.24）%，显著低于正常对照组织（4.34±3.28）%,（Plt;0.01）。在恶性肿瘤组织中，CD8+/CD28+细胞检出率和APO表达水平呈显著正相关（r=0.599 5,Plt;0.01）。结论 恶性肿瘤能引起组织中CD8+/CD28+细胞表达率和APO检出率显著下降，且二者检出率呈显著正相关。恶性肿瘤组织中CD8+/CD28+细胞杀伤肿瘤细胞的机制可能与诱导肿瘤细胞凋亡密切相关。 【关键词】 流式细胞术　恶性肿瘤　T细胞　细胞凋亡 　Correlation between CD8+/CD28+ Cell Expression and Apoptosis in Malignant Tumor Tissue of Patients with Malignant Tumor Key words：Flow cytometry； Malignant tumor； T lymphocyte；Cell apoptosis 　　尽管机体有着多种抗肿瘤的免疫效应，肿瘤仍可以在体内发生、发展，而且随着肿瘤的进展，反过来抑制了机体的免疫功能。这提示免疫功能和肿瘤发生间的作用是相互的，一方面免疫功能能影响肿瘤的发展，另一方面肿瘤也能改变机体或组织的免疫功能状态，机体的免疫功能状态与肿瘤的发生、发展过程密切相关[1]。研究恶性肿瘤局部组织的免疫状态，探讨局部组织免疫细胞杀伤肿瘤细胞的机制，不仅可以全面了解肿瘤的生物学特性，而且也有助于在临床上选用适当的生物疗法防治肿瘤，为肿瘤的免疫治疗提供理论依据。为此，我们应用流式细胞术（flow cytometry, FCM）检测了190例恶性肿瘤患者局部肿瘤组织中CD8+/CD28+ 细胞检出率和细胞凋亡（APO）水平，并分析其相关性，结果报告如下。 1 资料与方法 1.1 病例选择 选择本院2004年5月～2005年6月住院手术并经病理证实的恶性肿瘤患者190例，包括乳腺癌115例、卵巢恶性肿瘤39例、宫颈癌23例、肝细胞癌13例。男性12例，女性178例；年龄27～76岁，中位年龄51.2岁。均为初诊患者，在手术前未进行化疗、放疗或生物治疗。选择手术后新鲜肿瘤组织作为检测样品；另外在乳腺癌患者中选择临床Ⅰ期患者14例，在其肿瘤手术切缘外10cm左右处取1小块乳腺组织作为正常对照。 1.2 方法 1.2.1 仪器、分析软件与试剂 流式细胞仪为FACSCalibur,美国BD公司产品，氩离子激光器功率为15 mW，激发光波长为488 nm。利用BD公司提供的CellQuest软件程序，每份样品均获取2×104 个细胞，并用该软件程序分析CD8+/CD28+ 细胞的表达率；另用Modifit3.0软件程序分析样品细胞的DNA含量, 进而分析APO水平。CD8FITC/ CD28PE双标记单克隆抗体试剂购自苏州苏医生物基因技术有限公司。溶红细胞液为本实验室自行配制。 1.2.2 样品制备与染色方法 取新鲜组织1小块，用筛网法制成单细胞悬液，使细胞浓度调整为1×106/ml，取100μl细胞悬液，加10μl CD8FITC/ CD28PE双标记单克隆抗体试剂，在室温暗处反应20min，然后加入溶红细胞液1.5ml，溶解红细胞10min后，用pH7.4，0.01mol/L的 PBS缓冲液洗涤1次，再加0.5ml PBS液稀释混匀。然后上流式细胞仪检测分析CD8+/CD28+细胞的检出率。 恶性肿瘤组织细胞的DNA含量检测，采用FCMDNA检测分析常规方法[2]。在DNA直方图上，在二倍体细胞G1期细胞峰前的亚二倍体细胞峰为APO峰，以其细胞数占分析细胞的百分比作为APO水平。 1.3 统计学分析 计量资料采用t检验，恶性肿瘤组织CD8+/CD28+细胞检出率与APO水平行直线相关回归分析。Plt;0.05为差异有显著性。所有数据分析均采用SPSS11.0统计软件完成。 2 结果 2.1 恶性肿瘤组织的CD8+/CD28+ 细胞检出率和APO水平 恶性肿瘤组织的CD8+/CD28+ 细胞检出率和APO水平均显著低于正常对照组织（Plt;0.01），见表1。表1 恶性肿瘤组织CD8+/CD28+