探究温肾调经颗粒质量标准.doc

探究温肾调经颗粒质量标准 　　【摘要】 目的建立温肾调经感咳颗粒的质量标准。方法采用TLC法对处方中的肉苁蓉、菟丝子、茜草进行定性鉴别;采用HPLC法测定阿魏酸的含量。色谱柱为Kromasil C18柱(250mmtimes;4.6mm，5mu;m);流动相为甲醇-5%醋酸(20:80);流速为1.0ml/min;检测波长323nm。结果进样浓度在2.50～20.00mu;g/ml范围内线性关系良好(r=0.9999);平均回收率98.54%，RSD为1.22%(n=5)。结论本方法操作简单，准确可靠，重复性好，可作为温肾调经颗粒的质量控制方法。 　　【关键词】 温肾调经颗粒;阿魏酸;薄层色谱;高效液相色谱 　　温肾调经颗粒主要由当归、杜仲、菟丝子、肉苁蓉、茜草等药物组成，其处方来源于临床验方，具有温肾养血，利温化浊，祛瘀调经之功效，临床上用于肾阳不足，冲任血虚，湿浊瘀阻所致之月经后期，经量稀少，甚或经闭不通的治疗，效果显著，是我国在多囊卵巢综合征研究领域惟一进入临床阶段研究的中药制剂。本研究对其质量标准进行了定性和定量研究，制定了肉苁蓉、菟丝子、茜草的薄层色谱定性鉴别，并建立了制剂中阿魏酸的高效液相色谱含量测定方法。 　　1仪器与试药 　　岛津SCL-10AVP液相色谱仪(日本)，SPD-10AVP检测器，Class-VP工作站，KQ3200DE型医用超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);优普超纯水机UP-Ⅱ-10T(成都超纯科技有限公司);1/万及1/10万电子天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)。温肾调经颗粒(自制);毛蕊花糖苷对照品(中国药品生物制品鉴定所，批号1530-200202);菟丝子对照药材(中国药品生物制品鉴定所，批号21232-200401);茜草对照药材(中国药品生物制品鉴定所，121049-0301);阿魏酸对照品(中国药品生物制品鉴定所，100834-200701);硅胶G(薄层色谱用，青岛海洋化工厂);甲醇为色谱纯，水为自制二次重蒸水，其他试剂均为分析纯。 　　2方法与结果 　　2.1定性鉴别 　　2.1.1肉苁蓉的薄层色谱鉴别取本品10g，加甲醇50ml，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇1～2ml使溶解，作为供试品溶液。另取麦角甾苷对照品，加乙醇制成每1ml含2.5mg的溶液。另取不含肉苁蓉的样品同法制成阴性对照液。照薄层色谱法(《中国药典》[1]2010年版一部附录Ⅵ B)试验，吸取上述3种溶液各10mu;l，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-9%醋酸(20:3:2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5% FeCl3乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照溶液无干扰。 　　2.1.2菟丝子的薄层色谱鉴别取本品5g，加甲醇60ml，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇溶解，滤过，滤液浓缩至1～2ml，作为供试品溶液。另取菟丝子对照药材1g，研碎，加甲醇20ml，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇溶解，滤过，滤液浓缩至1～2ml，作为对照药材溶液。再取菟丝子阴性样品同法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录Ⅵ B)试验，吸取上述3种溶液各10mu;l，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲醇(5:5:3)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性对照溶液无干扰。 　　2.1.3茜草的薄层鉴别取本品10g，加甲醇50 ml，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加氯仿溶解，滤过，滤液浓缩至1～2 ml，作为供试品溶液。另取茜草对照药材1g，研碎，加甲醇10ml，超声处理30min，同法制成对照药材溶液。再取茜草阴性样品同法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录Ⅵ B)试验，吸取上述3种溶液各10mu;l，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-丙酮(4:1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性对照溶液无干扰。 　　2.2阿魏酸的含量测定 　　2.2.1色谱条件Kromasil C18柱(250mmtimes;4.6mm，5mu;m);流动相为甲醇-5%醋酸(20:80);流速为1.0ml/min;检测波长323nm，柱温35℃。 　　2.2.2对照品溶液的制备取阿魏酸对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加甲醇:5%醋酸(1:4)的溶液