氯诺昔康对手术致痛大鼠脊髓Fos蛋白表达影响.docVIP

氯诺昔康对手术致痛大鼠脊髓Fos蛋白表达影响 　【摘要】 目的 研究氯诺昔康对手术致痛大鼠脊髓Fos蛋白表达的影响。 方法 大鼠随机分为7组：注射用水组、氯诺昔康组、手术致痛组及氯诺昔康预处理组4组（分别于致痛前20 min腹腔注射氯诺昔康0.33，1，3，9 mg/kg）。3 h后取出脊髓,免疫组织化学检测Fos免疫反应阳性神经元（FLIN），观察Fos蛋白的表达。 结果 手术致痛组脊髓背角浅层Ⅰ～Ⅱ层Fos蛋白大量表达,氯诺昔康可减少Fos蛋白表达,并呈量效关系。 结论 氯诺昔康对手术致痛引起的脊髓背角Fos蛋白的表达能产生抑制作用,且呈剂量依赖性，同时对手术致痛有镇痛作用。 【关键词】 疼痛； 氯诺昔康； 脊髓； 原癌基因蛋白质cfos； 免疫组织化学； 疾病模型,动物； 消炎药,非甾类 　　非甾体类抗炎药氯诺昔康已越来越多用于临床术后镇痛[1]。本文拟研究氯诺昔康对手术致痛大鼠脊髓Fos蛋白表达的影响,评价氯诺昔康对手术致痛的镇痛作用。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　1.1.1 动物与分组 健康成年雄性SD大鼠[福建医科大学实验动物中心提供，许可证号:SCXK(闽)20040002)]50只,体质量280～320 g,随机分为7组：注射用水组（W组）、氯诺昔康组（L组）、手术致痛组（S组）、4个氯诺昔康预处理手术致痛组（L1S组、L2S组、 L3S组 、L4S组）。其中W组（腹腔注射注射用水1 mL）、L组（腹腔注射氯诺昔康3 mg/kg）、S组（手术致痛未预注氯诺昔康）为对照组,每组6只；L1S组、L2S组、 L3S组 、L4S组为实验组,每组8只,于手术致痛前20 min分别腹腔预注射氯诺昔康0.33,1,3 ,9 mg/kg。 　　1.1.2 试剂 一抗兔抗cFos(4): sc52,免疫组织化学染色试剂盒为PV9000（北京中杉生物公司）。 　　1.2 方法 　　1.2.1 疼痛模型制作 手术致痛参照文献[2],从足底近端0.5 cm处向趾部作一约1 cm的切口,挑起足底肌肉并纵向切割后缝合皮肤。 　　1.2.2 脊髓片制备及免疫组织化学分析 手术致痛3 h后,3 %戊巴比妥钠60 mg/kg麻醉下迅速开胸显露心脏,经左心室灌注预冷的4 %多聚甲醛固定,打开椎板,取脊髓L4～L5节断,位置相当于腰膨大中下段。将所取标本置于甲醛固定液中固定,经处理后石蜡包埋切片,切片经抗原修复、封闭非特异抗原、一抗兔抗Fos血清（1∶200）、二抗羊抗兔IgG血清及DAB呈色处理后,在光学显微镜下观察,计数Fos免疫反应阳性神经元（Foslike immunoreactivity neurons,FLIN）。每次实验均留取数片用PBS或正常羊血清代替一抗做对照实验。 　　1.2.3 结果判定 免疫组织化学标记显示：FLIN呈圆形或者卵圆形,细胞核呈棕黄色。每只大鼠随机取切片8张,计数每张切片脊髓背角浅层（Ⅰ～Ⅱ层）的FLIN数目,其均数为平均FLIN数目。 　　1.3 统计学处理 计量数据均以x±s表示,采用SPSS 11.0进行统计分析，组间比较用方差分析,两两比较用Dunnettt检验,Plt;0.05为差别有统计学意义。 　　2 结果 　　W组和L组未行手术致痛,FLIN极少,2组比较差别无统计学意义（P＞0.05）。S组经过手术致痛,未用氯诺昔康镇痛药,在脊髓L4～L5节断灰质出现大量FLIN,多集中在手术侧脊髓,最多分布在脊髓背角浅层（Ⅰ～Ⅱ层）,其次在深层（Ⅴ～Ⅵ层）,固有核和腹侧灰质也有少量FLIN。L1S组、L2S组、L3S组及L4S组大鼠脊髓灰质背角浅层FLIN数目随氯诺昔康剂量的增大呈减少趋势,且同S组比较差别有统计学意义（Plt;0.05）（表1，图1）。 　　3 讨论 　　3.1 疼痛与脊髓cfos的表达 自Brennan等提出大鼠切口疼痛模型后[2],文献报道大鼠切口疼痛可使脊髓背角即刻早期基因cfos原癌基因表达,其产物为Fos蛋白[3]。cfos原癌基因的表达可作为伤害性刺激的标志物。一定程度上,cfos被诱导的数量与所受刺激的强度时间及性质而异[4]。 　　　表1 脊髓灰质背角浅层Fos蛋白表达的比较（略） 　　Tab 1 The expression of Fos in dorsal horn of spinal cord 　　FLIN:Fos免疫反应阳性神经元. W组：注射用水组；L组：氯诺昔康组；S组：手术致痛组；L1S、L2S、L3S及L4S组为氯诺昔康预处理手术致痛组. 与S组比较,☆：Plt;0.05；与L1S组比较,#：Plt;0.05；与L2S组比较,△：Plt;0.05；与L3S组比较,□：Plt;0.05. 　　脊髓背角浅层（Ⅰ～Ⅱ层）