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温莪术内生真菌分离及其分类鉴定 　 作者：王艳红，汪洪 ，徐磊，杨信东 【摘要】 目的对温莪术不同部位内生真菌进分离和分类鉴定。方法采用内生菌常规分离法对健康温莪术根、茎和叶的内生真菌进行了分离和鉴定。结果从温莪术中分离得到了99株内生真菌，经鉴定为21属，其中根部42株涉及11属，茎部12株涉及4属，叶部45株涉及12属。结论温莪术的不同部位内生真菌的数量、分布和种群存在差异。 【关键词】 内生真菌； 分离； 鉴定； 温莪术 　Isolation and Identification of Endophytic Fungi from Curcuma aromatica Salisb 　　Abstract：ObjectiveTo isolate and identify the endophytic fungi of different positions in Curcuma aromatica Salisb.MethodsEndophytic fungi were isolated from healthy roots,stems and leaves of Curcuma aromatical Salisb and identified with conventional method.ResultsNinty-nine strains of endophytic fungi belong to 21 genus were isolated and morhpologically identified from Curcuma aromatica Salisb.Forty-two strains of 11 genera were isolated in roots,12strains of 4 genera in stems,and 45 strains of 12 genera in leaves.ConclusionThe quantity,population and distribution of the endophytic fungi are various in different position of Curcuma aromatica Salisb. 　　Key words： Endophytic fungi； Isolation； Identification； Curcuma aromatica Salisb 　　植物内生真菌(Endophytic Fungi)是存在于健康植物组织、器官内，并不引起明显病害症状的一类真菌［1］ 。植物与真菌的共生现象在生物进化过程中历史悠久而又极其普遍。虽然人们很早就知道内生真菌的存在，但直到1977年才对其重要性有所认识［2］。通过二十多年的研究，人们发现，作为地球上一类古老而又普遍的共生生物，植物内生真菌不仅可以提供人类丰富的药用性次生代谢产物［3］，而且有可能从整体上参与和协调植物与环境因子(包括病原微生物)的互作过程，从而对植物的抗逆性和环境适应性产生积极的影响［4］。 　　温莪术为姜科植物温郁金Curcuma wenyujin Y. H.Chen et C. Ling 的干燥根茎,其味辛、苦,性温。具有行气破血、消积止痛的作用［5］。含有莪术油、姜黄素、多糖、木脂素类、脂肪酸类及微量元素等多种不同生物活性的化学成分［6］。现代药理研究表明, 温莪术具有抗肿瘤、抗血栓、抗菌、抗病毒等作用, 对呼吸系统、消化系统、泌尿生殖系统、循环系统疾病和皮肤溃疡都有较好的疗效［7］。由此，人们对它的关注也由来已久。但至今对温莪术内生真菌的研究报道还很少，如果能在温莪术内生真菌中能够发现类似的活性物质，无疑找到了一种可替代温莪术植物的新型生物资源，为此本实验对温莪术内生真菌进行了系统的研究。现将温莪术内生真菌的分离鉴定结果及种群分布报道如下。 　　1 材料 　　1.1 材 料 　　分离所用植物材料为温莪术根、茎、叶，采自温州医学院莪术种植基地不同生长时期的温莪术，无病虫害。 　　1.2 培养基内生真菌分离培养基为PDA培养基(马铃薯200 g，葡萄糖20 g，琼脂20 g，水1 000 ml )和WA—抗生素培养基(琼脂20 g，氨苄青霉素200 mg，链霉素200 mg，水1 000 ml )；纯化鉴定培养基为PDA培养基和查氏培养基（蔗糖30 g，NaNO3 2 g，KCl 0.5 g，MgSO4·7H2O 0.5 g，FeSO4 0.01 g，K2HPO4 1 g，琼脂15～20 g，水1 000 ml）。 　　2 方法 　　2.1 内生真菌的分离取温莪术的根、茎、叶，用刀切成2～3 cm的小块，按下列步骤进行表面消毒：自来水冲洗干净，75%的酒精漂洗