照射后小鼠小肠上皮细胞TGF-β及其受体TGF-β R1及TGF-β R2表.docVIP

照射后小鼠小肠上皮细胞TGF-β及其受体TGF-β R1及TGF-β R2表 　【摘要】 目的 探讨TGF-β及其受体TGF-β R1和TGF-β R2在小鼠小肠上皮细胞受照射后再增殖中的作用及其意义。方法 C3HF/Kam小鼠全身一次性5Gy照射后，不同时间内杀死小鼠取出空肠，HE染色后计数隐窝细胞数和分裂相，同时以免疫组化结合计算机图像分析技术定量测定照射后不同时间内TGF-β、TGF-β R1和TGF-β R2在隐窝区和绒毛区的表达。结果 照射后3～4天小鼠小肠隐窝细胞和分裂相均达到高峰。而照射后一天TGF-β表达在绒毛区和隐窝区即下降至最低点；同时TGF-β R1和TGF-β R2也不同程度的下降。结论 TGF-β、TGF-β R1和TGF-β R2在小鼠小肠上皮细胞受照射后的再增殖过程中可能起着负反馈的调节作用。 【关键词】 小鼠小肠；照射；TGF-β；TGF-β R1；TGF-β R2 【Abstract】 Objective To study the role of expressions of TGF-β，TGF-β R1 and TGF-β R2 in repopulation of jejunum following irradiation.Methods Using the jejunum of C3HF/Kam mouse as material，the mitotic index and the number of crypt cells were measured at different times after single whole body irradiation of 5Gy.At the same time，the expressions of TGF-β，TGF-β R1 and TGF-β R2 in crypt area and villi area were also tested quantitatively by automated immunohistochemical staining method.Results The mitotic index and the number of crypt cells reached peaks three-four days after irradiation.Meanwhile，the expression of TGF-β in crypt area and in villi area showed the lowest value one day after irradiation and the expreesions of TGF-β R1，2 decreased in some degrees both in crypt and in villi.Conclusion The results indicate that the decreased expression of TGF-β， TGF-β R2 play the negative feed back role in repopulation of mouse jejunum after irradiation. 【Key words】 mouse jejunum；irradiation；TGF-β；TGF-β R1；TGF-β R2 已有研究表明，小鼠小肠的隐窝细胞是小肠的干细胞，小鼠小肠的再增殖开始于照射后的第3天。笔者的初步研究表明，小鼠小肠上皮照射后的再增殖与转化生长因子TGF-α，上皮生长因子EGF及其受体EGF-R密切相关，TGF-α、EGF及EGF-R很可能在小鼠小肠上皮再增殖过程中起着类似“触发”信号的作用［1，2］。然而，小肠上皮的增殖过程是一“自控系统”，它的过程必然受多种因子的调节。本文研究另一类转化生长因子TGF-β及其受体在小鼠小肠上皮受照射后再增殖中的作用。 1 材料和方法 实验采用16周龄的雄性C3HF/Kam纯系小鼠。放射源为250kV的X射线，吸收剂量率为1.6Gy/min。照射时将小鼠置于特制的有机玻璃盒内，小鼠不麻醉。全身一次照射吸收剂量为5Gy。照射后不同时间拉颈处死小鼠，取出空肠，浸入10%福马林中，石蜡包埋。每个时间点取3只动物，每只动物取3张切片。 部分切片常规HE染色后，高倍镜下计数每个隐窝的隐窝细胞数及分裂细胞。计数前者时取每50个隐窝的平均细胞数；计数后者时共计数500个隐窝细胞，然后换算成百分比。 TGF-β及其受体TGF-β R1和TGF-β R2的表达测定采用ABC染色法。羊抗鼠的抗TGF-β 、抗TGF-β R1、抗TGF-β R2的单抗隆抗体及配套的试剂