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甘草RNA提取方法探究 　【摘要】 　　目的从甘草不同组织中提取高质量的RNA，为进一步合成双链cDNA，构建甘草cDNA文库奠定基础。方法采用几种常用方法(高盐溶液法、LiCl沉淀法、CTAB法和SDS法)提取甘草不同组织的RNA，并以1%琼脂糖凝胶电泳和A260/A280，A260/A230的值作为指标。结果LiCl沉淀法对于甘草不同组织中的RNA具有更好的提取效果，条带清晰，完整性较好，且A260/A280和A260/A230值均接近于2.0，根部组织产量达0.220 μg/mg，叶片组织产量达0.275 μg/mg。结论采用LiCl沉淀法提取甘草不同组织中的RNA具有更好的效果，适于从富含多糖的植物组织中提取RNA。 【关键词】 甘草 RNA提取 多糖 　　Abstract:ObjectiveTo isolate the high quality RNA from different tissues of Radix Glycyrrhizae efficiently so as to lay a foundation to synthesize the cDNA and construct the cDNA library. MethodsTotal RNA was isolated from different tissues of Radix Glycyrrhizae by some familiar ways, such as high-salt solution, lithium chloride sedimentation, CTAB and SDS. Use 1% agarose gel electrophoresis and UV numerical value of A260/A280 and A260/A230 as the standard.ResultsThe method of lithium chloride sedimentation had the best effect to extract total RNA from different tissues, the bands were clear on agarose gel and the gritty of RNA was good. The ratios of total RNA A260/A230 and A260/A280 were close to 2.0, respectively. The yield of the root was 0.220 μg/mg fresh weight, and the leaf was up to 0.275μg/mg fresh weight. ConclusionThe method of lithium chloride sedimentation has the best effect to extract total RNA of different tissues, and this method is also applicable to the plants with much amylase. 　　Key words:Radix Glycyrrhizae； RNA extraction； Amylase 　　甘草(Radix Glycyrrhizae)是一种富含多糖的中药材，临床应用广泛。随着甘草分子研究的不断深入，探索快速而有效的RNA提取方法，从甘草不同组织中获得高质量的RNA成为了研究的关键，也为进一步的研究如构建cDNA文库，RT-PCR，Northern杂交、基因芯片等奠定基础。有关植物RNA的提取方法已有不少报道［1］，但由于植物组织具有多样性，在实际应用中需要摸索出适应自身研究的植物材料的RNA提取方法。 　　本实验通过对比高盐溶液法、LiCl沉淀法等4种常用的植物RNA提取方法，对甘草不同组织的RNA进行分离研究，从而找到高效、简便、适用于甘草不同组织的RNA提取方法。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料一年生甘草的叶片和根部组织。用0.1%生理盐水洗净，用干净吸水纸擦干，分成1 g/份存于离心管中，于液氮中迅速冻存，然后转入-70℃冰箱保存。 　　1.2 方法 　　1.2.1 高盐溶液法分别取叶片和根组织各1 g，放入研钵中，加入液氮研磨成细粉，加入10 ml的抽提缓冲液（100 mmol/L Tris-HCl (pH 9.5)，10 mmol/L EDTA (pH 8.0)，4 mol/L异硫氰酸胍，5%的β-巯基乙醇，2% PVP），静置，待抽提缓冲液缓慢融化，用力研磨，直至分散混匀，分装在4个10 ml离心管中。12 000 g离心5 min