白英提取液对人肺癌A549细胞凋亡及Fas-FasL基因表达影响.docVIP

白英提取液对人肺癌A549细胞凋亡及Fas/FasL基因表达影响 　 作者：涂硕，韦星，赵小曼，余乐涵，万福生 【摘要】 　　目的　探讨白英提取液(STE)对人肺癌A549细胞凋亡及fas/fasL基因表达的影响。方法体外培养肺癌A549细胞，以0（正常对照组），10，20和40 mg/ml STE处理A549细胞48 h，并以25 mg/L顺铂（DDP）作为阳性对照。采用MTT法检测细胞增殖抑制率，TUNEL法检测凋亡率，半定量RT-PCR检测fas和fasL mRNA表达。结果与正常对照组比较，STE各浓度组细胞增殖抑制率显著上升（P﹤0.01），细胞凋亡率明显升高（P﹤0.01），基因fas mRNA表达显著上升（Plt;0.05或Plt;0.01），而fasL mRNA表达明显下降（Plt;0.05或Plt;0.01）。结论STE通过上调fas基因和下调fasL基因表达，诱导细胞凋亡，从而抑制A549细胞增殖。 【关键词】 白英；A549细胞；细胞凋亡；Fas/FasL基因 　　 　　Abstract：ObjectiveTo explore the effects of Solanum lyratum Thunb. Extract (STE) on induction of apoptosis and the expression of fas and fasL genes in A549 cells. MethodsLung cancer A549 cells were treated with 0（control group），10，20 and 40 mg/L for 48h, and the cells were treated with 25 mg/L DDP as positive control. The proliferation inhibitory rate was evaluated by MTT assay. Induction of cell apoptosis rate was determined by TUNEL method. The expression of fas and fasL mRNA was detected by semi-quantitive RT-PCR.ResultsCompared with control group, the inhibitory rate was increased obviously（P﹤0.01）, the apoptotic rate was increased markedly(Plt;0.01).The expression of fas mRNA was increased significantly(Plt;0.05 or Plt;0.01), and fasL mRNA was decreased markedly(Plt;0.05 or Plt;0.01) in STE groups. ConclusionSTE can induce apoptosis by up-regulating expression of fas and fasL genes, and inhibiting the development of A549 cells. 　　Key wordsSolanum lyratum Thunb.； A549 cells； Apoptosis； Fas； FasL 　　白英Solanum lyratum Thunb.，ST为茄科植物，又称白毛藤，临床常用于鼻咽癌、肺癌、肝癌、肺癌、食道癌、胃癌等多种癌症治疗［1］。研究发现，白英提取液（STE）可通过上调fas和下调fasL基因表达，诱导Hela细胞凋亡［2］。本研究通过体外细胞培养，观察STE诱导人肺癌A549细胞凋亡及其对fas/fasL基因表达的影响，探讨ST对肺癌作用的可能分子机制，为肺癌防治提供实验依据。 　　1 器材与方法 　　1.1 材料 　　1.1.1 细胞 　　人肺癌A549细胞株由中科院上海细胞生物研究所细胞库提供。 　　1.1.2 试剂与仪器 　　胎牛血清(FBS)、RPMI 1640培养基为GIBCO公司产品，四甲基偶氮唑蓝（MTT）为上海普飞生物技术有限公司产品，原位细胞凋亡检测试剂盒为北京中杉金桥生物技术公司产品，总RNA提取试剂盒为BIODEV-TECH公司产品，Access RT-PCR system为Promega公司产品，PCR引物为上海生物工程公司合成。KHB K3 酶标仪(芬兰), 倒置显微镜(Cioc)，BX51型显微镜（OLYMPUS），PCR仪（杭州郎基）。 　　1.2 方法 　　1.2.1 STE的制备