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竹叶总黄酮提取物分离纯化方法探究 　【摘要】 目的优化竹叶总黄酮的分离纯化工艺。方法采用单因素实验，以芦丁为标准品，用分光光度法测定样品中总黄酮含量。结果乙醇浸取浓度、萃取有机溶剂、大孔树脂以及乙醇洗脱浓度对竹叶总黄酮的分离纯化有一定影响。结论竹叶粉末采用75%乙醇提取，氯仿萃取除杂质，再经D101大孔树脂吸附，70 %乙醇洗脱，可使总黄酮含量达到85%以上。 【关键词】 竹叶； 总黄酮； 提取工艺 Abstract：Objective：To optimice the extraction technology of total flavone in bamboo leaves. Methods Single factor was utilized to optimize extracting process. Concentration of total flavone was measured by the spectrophotometer, rutin used as standard sample.ResultsContent of ethanol, extracts of organic solution, washoff solution and different kind of resin had effect on the extraction of total flavone from bamboo leaves. ConclusionWhen powder of bamboo leaves was extracted with 75% alcohol, chloroform is used to remove impurity, D101 resin is used for adsorption, then 70% alcohol is used to wash-off, the final concentration of total flavone can exceed 85%. Key words：Bamboo leaves； Total flavone； Extracting technology 竹叶为禾本科纲竹属植物毛竹Phyllostachys pubescens的叶子。竹叶黄酮有抗衰老、抗应激、抗疲劳、调节血脂、阻断亚硝化反应、增强免疫能力、抗菌、抑菌等作用［1］。目前竹叶黄酮被大量应用于药品、食品、化妆品等生产中。 竹叶是在竹材加工过程中的剩余物，目前还没有被充分利用。竹叶主要含有黄酮类化合物，用不同溶剂对黄酮类化合物成分进行提取分离鉴定， 表明竹叶Phyllostachys pubescens黄酮类化合物主要成分为碳苷类黄酮化合物，如牡荆苷、异牡荆苷、荭草苷、异荭草苷等。黄酮类成分有明显的抗溃疡、解痉、抗菌、抗炎、降血脂、镇痛和雌性激素等生物活性和生理活性作用。大孔吸附树脂提取黄酮类化合物已有许多报道，如用DA型大孔吸附树脂提取四季青总黄酮；应用D101吸附树脂精制银杏叶提取物(GBE)，制得含黄酮约38%的GBE产品；也有用ZTC澄清剂沉降，在酸性条件下吸附，制得GBE成品的黄酮含量在26 %以上［2］。 大孔吸附树脂是一种多孔性的高分子材料，具有多孔性和较大的比表面积，主要通过物理作用从溶液中有选择性地吸附有机物质，从而达到分离纯化的目的［3］。大孔树脂纯化技术是中药制药工业中颇具发展前景的实用新技术之一，已被成功地应用于黄酮类、皂苷类、生物碱类等药物的提取分离。 本实验采用大孔吸附树脂对竹叶总黄酮进行分离纯化，并对影响提取的一个关键因素进行优化，以期找到最佳的制备方法。 1 仪器与试剂 1.1 仪器日本岛津UV1601型紫外可见分光光度计；大孔树脂分别购于日本三菱公司（SP825，SP207，SP700）、成都晨光化工研究院（AB8，X5，D101）及天津南开大学（HP20，HP2MG，HP2MGL，NKA9）。 1.2 试药竹叶自采于重庆江津，晒干后，粉碎过筛，取过20～40目的粉末作为浸提实验材料；芦丁对照品（中国生物制品检定所）；其余试剂均为分析纯。 2 方法与结果 2.1 竹叶总黄酮含量的测定［4］精密称取于120℃干燥后的无水芦丁20 mg，用水溶解，定容100 ml，得浓度为0.2 mg/ml的芦丁标准液。分别精确量取上述标准液1，2，3，4 ml和5 ml置于10 ml的容量瓶中，用60％的乙醇补充至5 ml，各加5％的NaNO2溶液0.3 ml，摇匀，放置6 min，再各加10％的Al(NO3)3溶液，摇匀，放置6 min，加入1 mol/L的NaOH溶液4 ml，稀释至刻度，放置20 min，在510 nm处测定，以吸光度A对