粉葛试管块根诱导技术探究.doc

粉葛试管块根诱导技术探究 　 作者：张帆，祁建军，周丽莉，曲延英，李先恩 【摘要】 　　目的建立粉葛无菌苗培养及离体条件下诱导试管块根的体系。方法以粉葛的种子为外植体，MS培养基为基本培养基，培养条件为25℃， 2000～3000 Lx光照，12h/d。结果机械破坏种皮可有效地打破种子的休眠。除去顶芽有利于粉葛试管丛生芽的发生。已生根的试管苗转入块根诱导培养基中，根部明显增粗，形成粉葛的试管块根，最佳培养基配方为：MS+6-BA 2mg/L+NAA 0.1mg/L+蔗糖5%。结论无菌离体条件下可以诱导出粉葛试管块根。 【关键词】 粉葛 试管块根 诱导技术 　　Abstract:ObjectiveTo establish the sterilized seedling culture and the test tube earthnut induction system.MethodsThe seed of Pueraria thomsonii Benth.was cultured in MS culture medium as explant under the light length of 2000～3000Lx 12 h/d at 25℃. ResultsMechanical break could efficiently smash the dormancy of seed. The shearing away of the top sprout would contribute to the germination of fascicled bud. When the plantlet with induced roots were shifted to tuberous root inducing culture medium, the root obviously augmented which consequently led to the formation of test tube tuberous root. The optimized medium was MS+6-BA2mg/L+NAA 0.1 mg/L+sucrose 5%. ConclusionTest tube tuberous root of Pueraria thomsonii Benth.could be induced in sterile conditions in vitro. 　　Key words:Pueraria thomsonii Benth.; Test tube tuberous root; Induction technology 　　粉葛Pueraria thomsonii Benth.是豆科葛属多年生藤本植物，主产长江以南，在《神农本草经》《本草纲目》中均对其药用功效有记载。葛叶主金疮止血；葛花能解酒醒脾；葛谷（种子）治痢疾、解酒毒；葛根补心清肺、起阴气、解酒毒。其块根肥厚，富含淀粉和多种异黄酮类化合物。现代科学证明，葛根中的葛根黄酮，具有明显的抗凝血、抑制血小板聚集、降低血粘度、激活纤维蛋白酶等作用［1］。 　　生产中粉葛多用无性繁殖。多年的无性繁殖，易导致种质退化，表现为：块根变细、产量降低、质量下降。目前，茎尖脱毒是防止病毒侵害、解决种质退化的常用方法［2］，而粉葛茎尖上耳片较多且密被绒毛，进行组织培养时材料消毒相对困难，要得到粉葛茎尖脱毒苗有存在一定难度；且脱毒苗繁殖系数小、成活率低、育苗周期长，运输极不方便，从而大大限制了在生产上的推广。近年来，马铃薯、半夏、地黄等作物均培养出了试管块根（块茎），试图尝试用试管块根来代替脱毒苗在生产中的应用。其中，试管马铃薯的培养技术日趋完善，完全可以代替试管苗作为商品供应［3］。目前，粉葛试管块根的研究国内外尚无报道，本研究开展了粉葛试管块根的诱导的研究工作。诱导粉葛试管块根的形成，也为粉葛的块根形成的机理研究提供材料。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料湖南野生粉葛当年生的种子。 　　1.2 方法 　　1.2.1 培养基及培养条件选用MS基本培养基，蔗糖基本浓度为3%，用0.8%的琼脂固化，pH值为5.8～6.0，121℃湿热灭菌15 min，材料接种后置于光照培养箱中，培养条件为：25℃， 2000～3000 Lx光照，12 h/d。 　　1.2.2 无菌苗的获得将粉葛种子用剪刀剪破种皮，用流水冲洗20 min，移入超净工作台上，用75%的酒精进行表面消毒30 s，再用0.1%的生汞对种子消毒10 min，无菌水冲洗5～6次，将消毒处理的种子置于装有湿润的双层滤纸的三角瓶中，在光照培养箱中培养10 h。10 h后将吸涨的种子取出用0.1%的生汞进行第2次消毒，消