索氏提取法提取白术内酯Ⅰ工艺探究.doc

索氏提取法提取白术内酯Ⅰ工艺探究 　 作者：卫修来，陈镇，夏泉，许杜娟 【摘要】 　　目的建立白术内酯Ⅰ索氏提取的最佳工艺。方法采用正交设计优化的索氏提取工艺，以石油醚为提取溶剂，从白术(炒)中提取白术内酯Ⅰ，高效液相色谱法测定提取物中白术内酯Ⅰ的含量。结果采用索氏提取法提取白术（炒）中白术内酯Ⅰ的最佳工艺为白术（炒）的粒度为80目，加120 ml石油醚提取12 h。结论所确定的炒白术中白术内酯Ⅰ提取工艺合理可行，值得进一步向工业化生产推广。 【关键词】 白术内酯Ⅰ 索氏提取 正交设计 　　白术始载于《神农本草经》并列为上品，原名“术”，来源于菊科植物白术Atractylodes macrocephala Koidz干燥根，主产于浙江、安徽、湖北、湖南等省。其性味甘、苦、温，具有健脾益气、燥湿利水、止汗、安胎等功效［1］。白术的主要化学成分为挥发油、内酯类化合物及多糖［2］。其中内酯类成分具有抗炎、抗肿瘤作用，该类成分还具有调节胃肠道功能和促进营养物质吸收的功能，尤以白术内酯Ⅰ作用明显［3］。本研究通过对白术内酯Ⅰ索氏提取工艺的最佳条件的研究，为今后进一步研究其药理作用提供实验基础。 　　1 仪器与试药 　　1.1 仪器 　　索氏提取器（中国科学技术大学玻璃仪器厂）；XW-80旋涡混合器（上海医科大学仪器厂）；TGL-16H高速离心机（珠海黑马医学仪器有限公司）；硅胶G板，规格5×10cm(青岛海洋化工厂)；Agilent 1100系列高效液相色谱仪；Agilent chemstion色谱工作站，RE-52旋转蒸发仪（上海青浦沪西仪器厂）；AB135-S电子天平（瑞士Mettler-Toledo公司）。 　　1.2 试药对照品白术内酯Ⅰ(butenolide Ⅰ) （纯度≥98%，编号1396-070212，产地：中药固体制剂制造技术国家工程研究中心）；白术（炒）购自安徽省国投药业，批号071120，经安徽中医学院中药学与中药资源教研室刘守金教授鉴定为白术同属。石油醚、苯、醋酸乙酯等均为分析纯，甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水。 　　2 方法与结果 　　2.1 提取方法白术（炒）饮片400 g，低温真空干燥并粉碎，分别过60，80，100目筛备用。分别按表1实验方案精密称取不同粒度的白术（炒）粉末15 g置索氏提取器中，加入规定量的石油醚，于水浴锅上提取，至规定时间后取提取液过滤，旋转蒸发仪浓缩至干，残渣加适量甲醇溶解并转移至5 ml量瓶中，取提取液适量于离心机上离心，上清液作为供试品溶液。 　　2.2 正交实验考察提取工艺根据预实验结果，选用影响提取效果的3个主要因素：粒度(A)、溶剂量(B)和提取时间(C)，每一个因素各选3个水平，制定因素水平表。见表1。表1 正交设计因素水平（略） 　　2.3 TLC定性鉴别分别取供试品溶液1～9号及对照品甲醇溶液（浓度为1mg/ml）各2 μl，分别点于同一硅胶G板上，置展开槽展开，展开剂为石油醚∶苯∶醋酸乙酯=15∶2∶1，展距为9 cm，取出，烘干，喷以10%硫酸乙醇置烤箱中，设定温度90℃放置30 min后，于可见光及365 nm紫外灯下检视。 　　　2.4 HPLC法测定白术（炒）中白术内酯Ⅰ的含量 　　2.4.1 色谱条件Dikma Kromasil C18(150 mm×4.6 mm)色谱柱，以甲醇∶水＝60∶40为流动相，流速为1.0 ml/min，柱温为30℃，检测波长为220 nm，进样量为10 μl。 　　2.4.2 对照品溶液的制备精密称取白术内酯Ⅰ1 mg，加甲醇溶解成1 mg/ml的储备液，精密吸取储备液适量，加甲醇稀释成浓度为0.50，0.25，0.12，0.06，0.03，0.01 mg/ml的溶液作为对照品溶液，照上述色谱条件下进样，以峰面积Y对质量浓度X绘制标准曲线，计算回归方程为Y＝28.931X＋48.38，r＝0.999 8。 　　2.4.3 精密度实验取浓度为0.03 mg/ml对照品溶液，在上述色谱条件下重复进样5次，计算白术内酯Ⅰ的峰面积RSD为1.12%(n＝5)。 　　2.4.4 稳定性实验精密吸取同一供试品溶液，每隔一定时间进样，测定峰面积。结果24 h内供试品峰面积的RSD为0.29%(n＝6)，表明供试品溶液在24 h内基本稳定。 　　2.4.5 重复性实验取同一批样品6份，分别按供试品溶液的制备方法进行提取、制备、测定。结果白术内酯Ⅰ含量的RSD为1.04% ，表明方法的重复性良好。 　　2.4.6 样品含量的测定取样品溶液1～9号各100 μl，分别加入400 μl的甲醇，用涡旋仪振动混合，照上述色谱条件下进样10 μl进行分析，由回归面积计算供试品样品中白术内酯I的含量。对照品溶液和供试品溶液的色谱图见图2。 　　2.4.7 含